Efeito adjuvante da Propionibacterium acnes sobre células-tronco mesenquimais murinas - Silveira, Gabriela da Paz [UNIFESP] (2016)
Introdução: O papel de adjuvante biológico da Propionibacterium acnes tem sido largamente demonstrado, seja usando a bactéria morta, por fenol ou calor, ou utilizando seu componente polissacarídico solúvel (PS). Ambos capazes de modular diferentes populações celulares, induzindo, por exemplo, aumento no número de células-tronco hematopoiéticas (CTH). As CTH estão localizadas na medula óssea onde dividem o espaço com as células-tronco mesenquimais (CTM) e há uma relação parácrina entre elas. Sabendo da importância das CTM para a terapia regenerativa e da ação moduladora da P. acnes sobre diferentes tipos celulares acreditamos que os adjuvantes também poderiam atuar sobre as CTM. Objetivo: Avaliar o efeito adjuvante da suspensão de Propionibacterium acnes morta pelo calor ou com a fração polissacarídica solúvel purificada (PS) sobre a capacidade proliferativa e imunomoduladora das células-tronco mesenquimais murinas. Métodos: Camundongos C57Bl/6j foram tratados com P. acnes (140?g de proteína/350uL/animal) ou fração polissacarídica da P. acnes (PS) (25?g de polissacarídeo/350uL/animal) ou salina 350 ?l/animal, via subcutânea, por 3 semanas. Uma semana após a última dose as células da medula óssea foram, em parte, purificadas por citometria de fluxo para subpopulações de CTM, avaliando-se as populações simples positivas para CD90, CD105 e CD73. Outra parte foi mantida em cultura até 3ª passagem para obtenção das CTM, estas avaliadas quanto à capacidade de proliferação por citometria de fluxo também, durante 3, 6 e 9 dias de cultivo utilizando o marcador CFSE. As CTM e suas subpopulações foram transplantadas em modelo animal submetidos a lesão traumática no córtex motor esquerdo. Após 24h e 7 dias do transplante foi avaliada a expressão de citocinas IL-6, TNF-?, TFG-?, Il-4 e Il-10, utilizando-se a técnica qPCR. Foi realizada a imunohistoquímica de cortes histológico do cérebro dos animas que receberam o transplante de CTM para avaliar a presença de células células-tronco neurais (GFAP+BrdU+) e também de neuroblastos (DCX+BrDU+). Além disso, CTM obtidas de animais knock out (KO) para o receptor toll-like 2 tratados com a P. acnes também foram transplantadas no mesmo modelo de lesão. Resultados: Tanto a P. acnes como o PS aumentaram a capacidade proliferativa das CTM in vitro e incrementaram o potencial modulador dessas células. A CTM-P. acnes promove diminuição de citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNF-? após 24h do transplante e aumento da citocina anti-inflamatória IL-4. O transplante de CTM-PS resulta em aumento de IL-4 e IL-10 na fase aguda da lesão. Após 7 dias do transplante é possível observar aumento de TGF-? no grupo que recebeu CTM-PS. Além disso, foi possível detectar aumento de células-tronco neurais (GFAP+BrdU+) e também de neuroblastos (DCX+BrDU+) na zona subventricular (SVZ) após transplante de CTM-PS. O efeito dos adjuvantes sobre a modulação das subpopulações de células-tronco mesenquimais obtidas e purificadas diretamente da medula óssea foi semelhante ao observado na utilização da população de CTM heterogênea obtida em cultura, detectando-se também a diminuição de IL-6 e TNF-? em todos os grupos de tratamento. As subpopulações CTM-PS-CD90+ e CTM-PS-CD105+ promoveram aumento bastante pronunciado de IL-4, sendo que CTM-PS-CD105+ também intensificou a expressão de IL-10 após 24h do transplante. O grupo CTM-P. acnes-CD90+ teve aumento expressivo de IL-10 e o grupo CTM-P. acnes-CD73+ de TGF-? e IL-10. Os efeitos da P. acnes sobre as CTM estão relacionados com a participação do receptor toll-like 2 pois o aumento de TGF-? e IL-10 induzido pela bactéria foi abolido quando os animais receberam transplante de CTM-P. acnes oriundas de animais KO TLR2. Conclusão: A P. acnes e a sua fração polissacarídica se mostram como uma importante alternativa para a obtenção de culturas enriquecidas de CTM com alta capacidade imunomoduladora. Além disso, foi possível determinar quais subpopulações de CTM contribuíram para a resolução da inflamação assim como a importância do TLR2 na indução dos efeitos adjuvantes da P. acnes sobre as CTM.