Mecanismos De Sinalização Celular Envolvidos Na Secreção De Il-8 Por Células Epiteliais Durante A Interação Com Histoplasma Capsulatum, Quimiotipos I E Ii - Alcantara, Cristiane [UNIFESP] (2018)
Histoplasma capsulatum var. capsulatum é o agente etiológico causador da histoplasmose, uma micose humana sistêmica com distribuição mundial. A ausência ou presença da ( 1,3)glucana na superfície das leveduras de H. capsulatum classifica os isolados deste fungo em quimiotipos I ou II, respectivamente. Neste trabalho, verificamos que, por imunofluorescência indireta e citometria de fluxo, os isolados 496 e 268 de H. capsulatum apresentaram reatividade com o anticorpo monoclonal que reconhece ( 1,3)glucana, assim classificamos os isolados 496 e 268 como sendo de quimiotipo II. Posteriormente, a partir das culturas destes isolados, selecionamos espontaneamente clones de H. capsulatum que não apresentavam ( 1,3)glucana em sua superfície. Estes clones foram denominados de 496L e 268L e, contrastando com os isolados selvagens, não possuíam ( 1,3)glucana na superfície fúngica e, quando em cultura em meio sólido, formavam colônias lisas. Demonstramos que ambos os isolados de quimiotipo II (496 e 268) e seus respectivos clones induziram, em níveis semelhantes, a secreção da quimiocina IL8 pelas células epiteliais de pulmão humano A549. Observamos que o isolado selvagem de quimiotipo I G217B também induziu aumento estatisticamente significante nos níveis de IL8 em relação aos níveis basais secretados pelas células epiteliais, porém, esta secreção foi menor quando comparada à secreção promovida pelo fungo de quimiotipo II 268. Posteriormente, analisamos algumas vias de sinalização celular que são ativadas por estes fungos nas células A549. Nossos resultados demonstraram que o contato das células A549 com as leveduras de H. capsulatum, isolados 268 e G217B e com o clone 268L, promoveu a ativação de SFKs, Syk e PKC δ. Além disso, utilizando inibidores específicos para a ativação de SFKs (PP2) e Syk (PRT062607), verificamos que a ativação das SFKs foi mais relevante para a secreção de IL8 quando as células foram infectadas com o isolado de H. capsulatum 268 e o seu clone 268L, enquanto que a ativação de Syk foi importante para a secreção de IL8 durante a infecção com G217B. Por outro lado, utilizando um inibidor de PKC δ (PIPKC δ), observamos que a ativação de PKC δ é importante para a secreção de IL8 pelas células epiteliais A549 durante a infecção com ambos os isolados (268 e G217B) e o clone (268L). Além disso, durante a interação das células A549 com os fungos estudados, há ocorrência de um feedback entre SFKs e Syk. Assim, conjuntamente, estes resultados mostram pela primeira vez que os quimiotipos I e II de H. capsulatum promovem, em células epiteliais humanas, níveis diferentes de IL8 que são dependentes de vias distintas de sinalização.