Caracterização dos mecanismos de resistência à polimixina B em isolados clínicos de A. baumannii após a exposição in vitro à mesma e sua implicação na adesão e produção de biofilme - Carneiro, Talita Barone [UNIFESP] (2016)
Acinetobacter baumannii é um dos principais patógenos isolados de infecções graves em todo o mundo. Esses microrganismos possuem grande capacidade de se adaptar e sobreviver em condições adversas o que contribui para sua persistência e consequente aquisição de mecanismos de resistência, limitando as opções terapêuticas disponíveis. As polimixinas constituem uma das últimas opções terapêuticas para o tratamento de infecções graves por A. baumannii multirresistentes. Neste estudo avaliamos os mecanismos de resistência à polimixina B e a produção de biofilme em isolados clínicos de A. baumannii após a exposição in vitro à polimixina B, em concentrações crescentes, por 10 dias consecutivos. Os genes que compõe o sistema regulatório pmrCAB e a via de biossíntese do LPS, lpxACD, além dos genes envolvidos com a produção de biofilme ompA, csuE e pgaC foram avaliados por sequenciamento e qRT-PCR. As cargas de superfície dos isolados foram avaliadas por quantificação do potencial zeta de membrana. A produção de biofilme foi avaliada fenotipicamente pela quantificação em microplaca de poliestireno. Depois de expostos à polimixina B, todos os isolados clínicos de A. baumannii tornaram-se resistentes à essa droga e redução das CIMs para todos os outros antimicrobianos testados, com exceção da minociclina. Cinco isolados apresentaram mutação no gene pmrB e 3 isolados no lpxC. Um isolado apresentou mutação concomitante nos dois genes pmrB e lpxC. A maioria dos isolados apresentou redução da transcrição de pmrB e aumento da transcrição de lpxC. Apesar disso, não foi observada alteração significativa no potencial zeta de membrana. Também não foi observada alteração significativa na quantificação da produção de biofilme em microplaca de poliestireno. Entretanto, todos os isolados apresentaram aumento da transcrição de ompA e a maioria deles (12 isolados) teve a transcrição de csuE aumentada após a exposição à polimixina B. Ambos os genes estão envolvidos com adesão da bactéria em superfícies bióticas e abióticas. Onze dos 16 isolados apresentaram aumento também de pgaC, gene responsável pela produção da matriz do biofilme em Acinetobacter spp. Este estudo confirma a complexidade dos mecanismos de resistência à polimixina B, já que o mesmo não pode ser determinado na maioria dos isolados. Embora mudanças possam ter ocorrido na membrana celular externa dos isolados de A. baumannii resistentes à polimixina B, estas não foram suficientes para alterar significativamente a carga negativa da membrana celular externa potencial de membrana, nem a capacidade de produzir biofilme destas amostras.