Estudo da expressão das subunidades do Complexo Repressor de Polycomb 2 em epitélio olfatório e vomeronasal de camundongos - Demasceno, Érika [UNIFESP] (2023)
Os receptores olfatórios (ORs) e os receptores vomeronasais (VRs) são expressos pelos neurônios olfatórios (OSNs) e neurônios vomeronasais (VSNs), respectivamente, e são responsáveis pela detecção precisa de diferentes moléculas no meio ambiente, o que é crucial para a sobrevivência dos animais. Esses receptores são membros das maiores famílias gênicas de mamíferos, codificados por centenas de alelos, e apresentam expressão monogênica e monolalélica nesses neurônios. Os OSNs apresentam uma arquitetura nuclear peculiar na qual a heterocromatina facultativa se concentra, frequentemente, ao redor de um bloco central de heterocromatina constitutiva. Os VSNs parecem apresentar a mesma organização da heterocromatina facultativa. O Complexo Repressor de Polycomb 2 (PRC2) é responsável pela trimetilação da lisina 27 da histona 3 (H3K27me3), que caracteriza a heterocromatina facultativa e leva ao silenciamento da transcrição gênica. PRC2 é formado por 3 principais subunidades, Ezh2/Ezh1, Suz12 e Eed, sendo Ezh2 e Ezh1 as subunidades catalíticas do complexo. Este projeto teve como objetivo caracterizar a expressão dos transcritos, por Hibridização In Situ de RNA, e das proteínas, por imunofluorescência, de Ezh2, Suz12, e Eed em epitélio olfatório de camundongo. Caracterizamos também, por imunofluorescência a expressão, de Ezh2 e Suz12 em epitélio vomeronasal de camundongos. Para realizar os ensaios de Hibridização in situ de RNA construímos os vetores e sintetizamos as sondas, sense e antisense, para os transcritos murinos de Ezh2, Suz12 e Eed. Os ensaios de Hibridização In Situ de RNA em cortes coronais de epitélio olfatório de camundongos de 4 e 21 dias de vida mostraram que Ezh2 é expresso na camada basal do epitélio, que corresponde região marcada para Ngn1, marcador células globosas. A expressão de Suz12 foi observada na camada basal e também na camada marcada por GAP43, marcador de neurônios imaturos, e por OMP, marcador de neurônios maduros. Não obtivemos marcação específica com a sonda para Eed. Para corroborar os resultados de Hibridização in situ de RNA analisamos os dados de sequenciamento de RNA de célula única de epitélio olfatório realizado por outro grupo de pesquisa. Essa análise mostrou que ao longo da diferenciação neuronal o número de células que expressam Ezh2, Suz12 e Eed diminui gradativamente, e que enquanto alguns neurônios olfatórios maduros expressam Suz12 e Eed, pouquíssimos desses neurônios expressam Ezh2 ou Ezh1. Os experimentos de imunofluorescência reforçam esses achados mostrando que neurônios olfatórios maduros expressam Suz12 e Eed, mas não expressam de Ezh2 em epitélio olfatório. Também em órgão vomeronasal observamos por imunofluorescência que os neurônios maduros expressam Suz12, mas não expressam de Ezh2. Esses resultados sugerem que uma vez que a enzima Ezh2 realizou a modificação covalente em H3K27 e silenciou regiões específicas do genoma da célula ao longo do processo de diferenciação do neurônio, no neurônio maduro a presença da enzima não seria mais necessária. Entretanto, as proteínas Suz12 e Eed se mantém em vários neurônios maduros, o que sugere que essas subunidades tenham no neurônio maduro um outro papel no núcleo celular que não apenas a ancoragem as subunidades catalíticas de PRC2 em regiões do genoma silenciadas.