Complexo Candida guilliermondii: identificação molecular, prevalência de espécies de interesse clínico e susceptibilidade aos antifúngicos - Pedoni, Diego Betto [UNIFESP] (2018)
Candida guilliermondii representa hoje um complexo de espécies emergentes, algumas delas com importância clínica, tendo sido descrita em 1912 por Castellani et al., a partir de cultivo de escarro de paciente com infecção brônquica. Atualmente é responsável por 1-25% das infecções de corrente sanguínea causadas por Candida sp. em diferentes regiões geográficas. A despeito das variações biológicas deste complexo, na vida real, estes isolados de C. guilliermondii são caracterizados como unidade taxonômica única quando identificados por métodos fenotípicos. Entretanto, a análise molecular do DNA genômico permite a diferenciação de 7 espécies distintas neste complexo: C. guilliermondii sensu stricto (Meyerozyma guilliermondii), C. fermentati (Meyerozyma carribicca), C. smithsonii, C. athensensis, C. elateridarum, C. carpophila e C. glucosophila. Até o momento, apenas três espécies do complexo foram associadas a infecções em humanos: C. guilliermondii, C. fermentati e C. carpophila. Há poucos dados sobre putativas peculiaridades biológicas e clínicas das infecções causadas pelas espécies deste complexo, sendo desconhecida sua prevalência em centros médicos no Brasil e América Latina. Objetivos: Determinar a prevalência de diferentes espécies do complexo Candida guilliermondii em episódios de candidemia sequencialmente documentados em centros médicos sentinelas, padronizar estratégia de identificação de espécies do complexo e avaliar o perfil de susceptibilidade in vitro a antifúngicos destes isolados. Material e Métodos: Um total de 150 isolados obtidos de pacientes com fungemia atendidos em 18 centros médicos do Brasil e América Latina, inicialmente identificados como pertencentes ao complexo C. guilliermondii foram submetidos a identificação por sequenciamento das regiões ITS do rDNA. Para o RFLP foi realizado uma PCR da região ITS do rDNA, e o fragmento do DNA amplificado foi submetido a uma digestão com a enzima Taq I. Em relação ao perfil proteômico destes isolados, a aquisição do perfil proteico foi realizada no sistema Bruker Daltonics com montagem da biblioteca in-house. Os testes de susceptibilidade in vitro foram realizados de acordo com documento M27-A3 e M27-S4 do CLSI, utilizando os antifúngicos: anfotericina B (AMB), fluconazol (FLC), voriconazol (VOR) e anidulafungina (AND). Resultados: Entre os 150 isolados estudados, 135 isolados foram identificados como C. guilliermondii sensu stricto, 13 isolados como C. fermentati e 2 isolados como C. carpophila. Utilizando ensaio de RFLP foi possível constatar que os isolados de C. guilliermondii sensu stricto apresentaram um perfil de bandeamento com 2 bandas (~250 e 190 pb) e C. fermentati e C. carpophila com 3 bandas (~250,190 e 150pb). Criamos um banco proteômico robusto com 5 perfis de isolados das espécies C. guilliermondii sensu stricto e C. fermentati. Em geral, nos testes de sensibilidade aos antifúngicos, os isolados de C. fermentati apresentaram médias geométricas de CIMs mais elevadas para FLC, AND e AMB (3,79 µg/mL, 2,11 µg/mL e 1 µg/mL, respectivamente) quando comparadas com dados de C. guilliermondii sensu stricto (2,70 µg/mL, 1,77 µg/mL e 0,66 µg/mL, respectivamente). Quanto aos valores de CIMs para VOR, ambas obtiveram a mesma média geométrica de 1 µg/mL. Conclusão: O sequenciamento das regiões do gene ribossomal permitiu a identificação acurada de todos os isolados testados. Utilizando a técnica de RFLP foi possível discriminar C. guilliermondii sensu stricto de C. fermentati, porém não foi possível discriminar C. carpohila de C. fermentati. Criamos um banco proteômico capaz de discriminar isolados de C. guilliermondii sensu stricto e C. fermentati. Na casuística estudada, isolados clínicos de C. fermentati apresentaram menor susceptibilidade frente aos antifúngicos FLC, AND e AMB, quando comparadas a isolados de C. guilliermondii sensu stricto.