Caracterização de genes hipotéticos e o papel da enolase da superfície de C. albicans na adesão celular

• Ano de defesa: 2010
• Autor(a) principal: Silva, Richard Cardoso da [UNIFESP]
• Orientador(a): Briones, Marcelo Ribeiro da Silva [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/00130000238vb
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Genes hipotéticos; Genes CaYlr339c e CaYdr187c; Enolase da parede celular; Plasminogênio; Adesão ao tecido gastrointestinal
• Link de acesso: http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/39418

Os agentes antifúngicos de uso corrente na medicina apresentam alta toxicidade e efeitos colaterais, tem como alvo poucos constituintes celulares, e muitos mecanismos de resistência já foram descritos. Com o objetivo de identificar potenciais novos alvos para drogas antifúngicas, duas ORFs hipotéticas de Candida albicans, potencialmente essenciais e com perfis singulares de expressão foram caracterizados. A ORF CaYlr339c é conservada em outros fungos do gênero Candida e Saccharomyces, é transcrita nas fases de levedura e hifa e a presença de seu produto protéico de aproximadamente 18 kDa foi constatada em extratos celulares de leveduras e hifas de C. albicans a partir de experimentos de western blot. A ORF CaYdr187c é conservada em poucos representantes do gênero Saccharomyces, é transcrita apenas na fase de levedura e potencialmente codifica uma proteína de superfície. Esses dados indicam que as ORFs selecionadas são genes reais e podem ser bons candidatos para a descoberta de novas funções e para o desenvolvimento futuro de novos agentes antifúngicos. Numa tentativa de testar o possível papel da proteína putativa de superfície CaYdr187cp na adesão celular, constatamos que a incubação de discos de tecido gastrointestinal com a proteína recombinante enolase, utilizada inicialmente como controle em nossos experimentos, foi capaz de inibir a adesão de C. albicans de maneira dose dependente em até 70%. O papel da enolase de superfície na adesão celular foi confirmado a partir da inibição da adesão em até 50% observada com o bloqueio da superfície de C. albicans com anticorpos anti-enolase. A capacidade de ligação da enolase de C. albicans ao plasminogênio foi confirmada a partir de experimentos de coimunoprecipitação. A pré-incubação de C. albicans com esta proteína foi capaz de inibir parcialmente sua adesão reforçando a idéia de que a enolase realmente esteja mediando à adesão deste organismo ao tecido gastrointestinal. Em contrapartida, a enolase não foi coimunoprecipitada com a fibronectina e a pré-incubação de C. albicans com esta proteína falhou em inibir sua adesão indicando que a inibição observada com a enolase recombinante não é decorrente do bloqueio da fibronectina no tecido gastrointestinal. Este trabalho é o primeiro a demonstrar que a enolase presente na superfície de C. albicans está envolvida em mecanismos de adesão, podendo ser um importante fator de virulência neste organismo. Assim, esta proteína poderia ser utilizada no desenvolvimento de vacinas ou estratégias de controles a partir da inibição da adesão de C. albicans ao tecido gastrointestinal com o intuito de prevenir sua proliferação.