Alteração da homeostase no sistema linfo-hematopoético em animais P2X7-/- e seus efeitos nos processos de proliferação e diferenciação - Souza, Kamylla Fernanda Souza de [UNIFESP] (2024)
As células-tronco hematopoéticas (CTH) têm o potencial de gerar todas as células do sistema linfo-hematopoético. Compreender seus mecanismos de auto-renovação, expansão e diferenciação, durante a hematopoese, tem grande relevância científica e clínica. Alguns moduladores, como o ATP e os receptores purinérgicos, têm sido estudados para compreender sua atuação nos nichos hematopoéticos, onde podem atuar na regulação e manutenção das CTH e células progenitoras. O receptor purinérgico P2X7 (P2X7R) é um receptor do tipo canal catiônico, que tem o ATP como seu principal agonista fisiológico, cuja atividade tem sido principalmente associada ao sistema imunológico, com poucos estudos mostrando sua participação na hematopoese. Neste estudo foram utilizados camundongos C57BL/6 wild type (WT) e nocaute para o P2X7R (P2X7-/-), para investigar a relevância e a função deste receptor na modulação das CTH e seus efeitos na diferenciação mieloide e linfoide. Ao avaliar a expressão do P2X7R nas células hematopoéticas extraídas da medula óssea, observou-se que o P2X7R é mais expresso nas células primitivas em contexto normal e após sepse. A imunofenotipagem das populações hematopoéticas da medula óssea e do baço mostrou um aumento do número de CTH e de células progenitoras mieloide e linfoide em animais P2X7-/-. A redução de eritrócitos na medula óssea destes animais foi compensada com o aumento desta população no baço e os parâmetros hematológicos não foram alterados. Também não houve alteração na capacidade das células hematopoéticas e progenitoras da medula óssea de formar colônias. Escolheu-se a indução de sepse pelo método de punção e ligadura cecal (CLP) para promover uma resposta inflamatória e modular o sistema linfo-hematopoético. O estímulo inflamatório induziu na medula óssea dos animais WT o aumento de CTH, c-Kit+, progenitores de granulócitos e granulócitos maduros, em contrapartida ao menor número de neutrófilos no sangue periférico. Os animais P2X7-/- apresentaram resposta contrária, com aumento do número de neutrófilos periféricos e redução de CTH e de todos os progenitores na MO. Tanto em animais WT quanto em P2X7-/- a eritropoese foi reduzida e houve menor expressão dos fatores de transcrição NF-E2, Gata-1, na MO. Em animais P2X7-/-, a indução de CLP levou ao aumento da formação de colônias hematopoéticas, especialmente de unidades formadoras de colônias de monócitos, mas no sangue periférico essas células estavam em menor número. Ademais, foram avaliados outros marcadores relacionados à hematopoese e inflamação como espécies reativas de oxigênio (EROs), citocinas pró e anti-inflamatórias, e imunoglobulinas. Animais P2X7-/- sépticos apresentaram altos níveis de EROs na cavidade peritoneal e medula óssea, mas não no plasma, onde houve aumento de interleucina-6 e imunoglobulina M. Em conjunto, nossos resultados destacam uma complexa interação do P2X7R com influência em diferentes aspectos da homeostase hematopoética e na dinâmica de proliferação e diferenciação em modelo inflamatório, abrindo caminho para futuras pesquisas e aplicações clínicas potenciais.