Estudo molecular dos genes de virulência em amostras clássicas de escherichia coli enteropatogênica - Teixeira, Nathalia Bibiana [UNIFESP] (2014)
Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é subdividida em duas subcategorias, EPEC típica (tEPEC) e EPEC atípica (aEPEC), tendo por base a presença ou ausência do plasmídio ?EPEC adherence factor? (EAF). Este estudo foi realizado para caracterizar geneticamente 51 amostras de aEPEC pertencentes aos sorogrupos clássicos de EPEC O26, O55, O111, O114, O119, O126, O127, O128 e O142, previamente caracterizadas como eae+ EAF- stx- isoladas de crianças com e sem diarréia de diferentes cidade brasileiras. As amostras foram analisadas quanto à presença dos genes de virulência de EPEC distribuídos na região LEE e no plasmídio EAF. Também incluímos neste estudo, a análise alélica dos genes eae e perA para melhor estabelecer a semelhança entre amostras clássicas O55, O111, O119 e O127 de aEPEC e tEPEC. Todas as 51 amostras estudadas apresentaram sequências de DNA associadas à região LEE, conforme determinado pela hibridação com as sondas genéticas LEEA, LEEB, LEEC e LEED. Em ensaios de PCR, a grande maioria das amostras foi positiva para os genes ler, escC, escN, cest e eae, enquanto 58% das amostras foram positivas para os genes espA, espB e espD. A maioria das amostras de aEPEC não hibridou com a sonda bfpA, com exceção de 11 amostras O119 e O142. Um total de 36 (70%) das amostras O26, O55,O111, O114, O119, O126, O127 e O142 hibridaram com sonda genética perABC. Os resultados obtidos com os experimentos de ?Southern blotting? demonstraram a presença da seqüência perABC em plasmídios de alta e/ou baixa massa molecular. Os resultados de PCR mostraram a presença dos genes perA em amostras O26, O128 e O142 e dos genes bfpA, perA, perB e perC em amostras O119 e O142. Análise do ?Southern blotting? das amostras O119 demonstrou que ambas as seqüências bfpA e perABC encontravam-se localizadas em um mesmo plasmídio de massa molecular compatível com o do plasmídio EAF, isto é aproximadamente 60 MDa. A análise da tipagem alélica dos genes eae e perA mostrou variabilidade alélica entre amostras O55, O111, O119 e O127 de aEPEC e tEPEC. Além disso, amostras O119 de tEPEC e aEPEC apresentaram tipos diferentes de pEAF, com base na combinação entre os alelos bfpA e perA. Concluíndo, nossos dados sugerem que pelo menos algumas amostras clássicas de EPEC evoluíram das tEPEC, especialmente as amostras O119 e O142 positivas para os genes bfpA e perA. Contudo, outros estudos serão necessários para investigar as relações genéticas entre amostras atípica e atípica O119.