Caracterização histomorfométrica e imunohistoquímica do sistema nervoso entérico e das células intersticiais de Cajal no cólon distal de camundongos SOX 10 DOM - Teixeira, Luciana Cristina [UNIFESP] (2021)
Introdução: A doença de Hirschsprung (DH) é uma aganglionose congênita caracterizada pela ausência de gânglios entéricos em variáveis comprimentos no intestino distal. Ocorre devido à uma falha das células da crista neural ao colonizar a região distal intestino. Fatores ambientais e genéticos coordenam a diferenciação e manutenção das células do trato gastro intestinal. O camundongo Dominante megacólon (SoxDom) representa um dos modelos genéticos da Doença de Hirschsprung. A mutação do gene que codifica o fator de transcrição Sox10, causa aganglionose intestinal do cólon distal e hipopigmentação, no abdome, membros inferiores e ponta da cauda. Objetivo: Correlacionar aspectos histomorfométricos (espessura) das camadas musculares longitudinal, circular, submucosa e distância entre os plexos e imunohistoquímica dos neurônios entéricos (enolase neurônio específica), células da glia (proteína S100) e das células intersticiais de Cajal (CD117) do cólon distal do camundongo Sox-10Dom. Métodos: 18 camundongos, divididos em três grupos: 6 C57BL/ 6J, 6 Dom/+ e 6 Wild type +/+. A genotipagem foi feita por sequenciamento. A espessura das camadas musculares foi realizada através das medidas em µm. As frações das áreas da expressão de enolase neurônio específica, proteína S100 e CD117, foram analisados por fração de área marcada. Para as análises estatísticas foram aplicados os testes ANOVA unicaudal e de TUKEY para comparações múltiplas. Nível de significância de p< 0,05. Resultados: a mutação na linhagem Dom/+ foi confirmada na genotipagem por sequenciamento. A hipertrofia foi observada nas camadas longitudinal, circular e submucosa da linhagem Dom/+ em relação às linhagens C57BL/ 6J e Wild type +/+. No plexo mioentérico foi encontrada diminuição da ENE, no Dom/+ em relação ao C57BL/ 6J e Wild type +/+ e no plexo submucoso não foi observada diferença estatística. Foi encontrada diminuição da proteína S-100, no plexo mioentérico no Dom/+em relação às linhagens C57BL/ 6J e Wild type +/+, no plexo submucoso não houve diferença estatística entre os grupos. Quanto à distribuição da CIC, não houve diferença nas camadas mioentérica e intermuscular. Conclusões: O sequenciamento genético confirmou a mutação dos camundongos heterozigotos Sox 10, ou seja, a inserção de resíduo de guanina, reforçando as características fenotípicas da linhagem, quais sejam a despigmentação no abdome e membros inferiores. Na caracterização do SNE pela imunohistoquímica, observou-se hipoganglionose nos camundongos Dom/+, por meio do anticorpo enolase neurônio-específica, na identificação dos neurônios entéricos, e da proteína S-100, na marcação das células da glia entérica. No modelo Sox Dom, na região aganglionar, a distribuição das CIC não foi afetada pela mutação do gene SOX10.