Estudo da relação clonal e dos mecanismos envolvidos na resistência à Polimixina B em isolados clínicos de Klebsiella pneumoniae obtidos em um hospital universitário da cidade de São Paulo - Braun, Graziela [UNIFESP] (2016)
Klebsiella pneumoniae é um micro-organismo ubíquo e de grande importância hospitalar devido a sua capacidade de adquirir resistência aos antimicrobianos, incluindo as polimixinas. A presente tese está dividida em dois artigos científicos. Artigo 1 – Neste estudo, o objetivo foi avaliar a emergência e a disseminação de clones de K. pneumoniae resistentes à polimixina B em um hospital universitário brasileiro durante um período de sete anos. Um total de 54 isolados de K. pneumoniae, sendo 36 resistentes e 18 sensíveis à polimixina B, foram obtidos de hemoculturas provenientes de pacientes internados no período de 2009 a 2015. A identificação bacteriana foi realizada por MALDI-TOF MS e o perfil de sensibilidade foi determinado por microdiluição em caldo, exceto para fosfomicina, para a qual foi realizada a técnica de ágar diluição. A relação clonal dos isolados foi avaliada pela técnica de PFGE. A detecção de genes codificadores de betalactamases e de 16S RNAr metiltransferases, bem como dos genes mgrB e mrc-1, relacionados à resistência às polimixinas, foi realizada pela reação em cadeia da polimerase(PCR) utilizando primers específicos. Durante o período de estudo, a taxa de resistência à polimixina B em isolados de K. pneumoniae aumentou 30,6% de 2009 a 2015. Alterações no gene mgrB foram detectadas em 33,3% dos isolados resistentes à polimixina B avaliados no estudo. Entretanto, nenhum dos isolados carreavam o gene plasmidial mcr-1. Em relação à resistência aos betalactâmicos, taxas elevadas de resistência foram observadas para os carbapenêmicos (>88,9%), as cefalosporinas de 3ª e 4ª geração (94,4%) e para piperacilina/tazobactam (97,2%). O antimicrobiano mais ativo contra os isolados de K. pneumoniae resistentes à polimixina B foi a gentamicina, seguido por tigeciclina (sensibilidade de 52,8%) e fosfomicina (sensibilidade de 50,0%). A maioria dos isolados de K. pneumoniae resistentes à polimixina B foi considerada como sendo extensivamente resistente a drogas (XDR), sendo que um isolado foi considerado panresistente (PDR). O gene blaKPC-2 foi observado em 77,8% dos isolados de K. pneumoniae resistentes à polimixina B. Os genes blaSHV-like, blaTEM-like, blaCTX-M-1/2-like e blaCTX-M-14-like também foram detectados. Além disso, o gene rmtB relacionado à resistência de alto nível aos aminoglicosídeos foi encontrado em seis isolados obtidos a partir do ano de 2014. A análise da relação clonal dos isolados mostrou a existência de dez grupos clonais de K. pneumoniae nos últimos sete anos, albergando diferentes determinantes de resistência. Em 2014, o clone C7, carreando os genes blaSHV-like, blaTEM-like, blaKPC-2, blaCTX-M-1/2-like, blaCTX-M-14-like e rmtB, surgiu no hospital de estudo e se disseminou no ano seguinte. Artigo 2 – O objetivo deste artigo foi avaliar os mecanismos envolvidos na resistência à polimixina B comparando-se isolados de K. pneumoniae clonalmente relacionados. Neste estudo, 14 isolados provenientes de hemoculturas de sete pacientes internados, sendo um isolado sensível e outro resistente à polimixina B, foram avaliados. Todos os isolados tiveram as concentrações inibitórias mínimas para polimixina B confirmada por microdiluição em caldo e para os demais antimicrobianos, o teste de sensibilidade foi realizado pelo sistema automatizado Phoenix® . Todos os 14 isolados apresentaram resistência às cefalosporinas de amplo espectro, às associações com inibidores de betalactamases e ao ciprofloxacino. O gene blaKPC-2 foi detectado em 12/14 isolados de K. pneumoniae avaliados. Ambos os isolados de cada paciente tiveram sua clonalidade confirmada pela técnica de PFGE e tiveram os genes pmrA, pmrB, pmrD, phoB, phoQ e mgrB, relacionados à resistência às polimixinas, sequenciados e comparados entre si. Dos sete isolados resistentes à polimixina B avaliados, cinco apresentaram alterações no gene mgrB. Destes, quatro apresentaram sequências de inserção (IS903b e ISKpn13) inativando o gene em questão, e em um isolado, verificou-se a deleção de 12 nucleotídeos no gene. Mutações nas proteínas PmrB e PhoP, que compõem os sistemas de dois componentes PmrAB e PhoPQ, também foram observadas separadamente em outros dois isolados resistentes à polimixina B. Esses resultados demonstram que a resistência à polimixina B pode ocorre durante a terapia com esse antimicrobiano, levando a falha terapêutica, principalmente pela mobilização de IS inativando o gene mgrB.