Avaliação do tratamento precoce ou tardio com N-acetilcisteína sobre o controle do estresse oxidativo na nefropatia diabética experimental - Nogueira, Guilherme Baia [UNIFESP] (2016)
Introdução Diabetes mellitus (DM) induz a mudanças intra e extracelulares, com aumento substancial de espécies reativas de oxigênio (ROS). ROS causam danos na microvasculatura sistêmica e renal, o que poderia ser um dos mecanismos envolvidos na fisiopatologia da nefropatia diabética. As ROS modulam substâncias como o óxido nítrico (NO), potente vasodilatador com papel importante na função renal. A N-acetilcisteína (NAC) é um antioxidante que atua reabastecendo os níveis intracelulares de cisteína, importante na formação da glutationa (GSH). Objetivo O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tratamento precoce ou tardio com N-acetilcisteína sobre o controle do estresse oxidativo/nitrosativo na nefropatia diabética experimental. MATERIAL E Métodos Utilizamos 60 ratos machos Wistar adultos que foram submetidos à nefrectomia unilateral. O diabetes foi induzido com estreptozotocina (60mg/kg, iv) em 40 animais (DM) e os demais receberam o seu veículo (CTL). Metade dos animais CTL receberam suplementação com NAC (600mg/L de água, ad libitum, CTL+NAC) e os demais receberam água como veículo da NAC. 10 animais diabéticos receberam NAC [600mg/L de água, ad libitum, DM+NAC (PRE)] e 10 receberam o veículo da NAC [água, DM (PRE)] durante 8 semanas após indução do diabetes. 10 animais receberam NAC [600mg/L de água, ad libitum, DM+NAC (TAR)] e 10 receberam o veículo da NAC [água, DM (TAR)] durante 8 semanas, iniciado após a 4ª semana de diabetes. N=10 cada grupo. Antes de qualquer manipulação dos animais, antes e depois dos tratamentos precoce ou tardio com NAC durante oito semanas, foram coletados urina e sangue e no final do protocolo, o tecido renal. Os dados foram expressos como média±EP e analisados através da análise estatística não paramétrica e não pareada t test, ou do teste one-way ANOVA, com o pós-teste de Tukey, quando apropriados, sendo considerados estatisticamente significantes quando p<0,05. xix Resultados DM (PRE) comparado com CTL mostrou aumento significante dos níveis de glicemia (mg/dL): 509,0±19,6 vs 85,0±3,7 e apresentou função renal alterada, com aumento da creatinina (mg/dL): 2,0±0,1 vs 1,1±0,1 e ureia plasmáticas (mg/dL): 92,3±8,3 vs 51,9±5,2 e da proteinúria (mg/24h): 40,1±3,9 vs 17,7±2,9 e ainda, redução do clearance de creatinina (mL/min): 1,0±0,1 vs 1,8±0,1. DM (PRE) apresentou aumento significante do TBARS, marcador de lipoperoxidação, no plasma (nmol/mL), urina (nmol/24h) e tecido renal (nmol/mg de proteína), respectivamente: 5,0±0,7 vs 2,9±0,1; 446,7±19,2 vs 97,7±8,5 e 8,0±0,8 vs 5,3±0,5 e também diminuição significante do NO plasmático (?M): 35,4±2,1 vs 54,4±3,8. A análise por meio do western blotting do grupo DM (PRE) mostrou aumento da enzima iNOS (0,8±0,2 vs 0,3±0,1) e diminuição da eNOS (0,9±0,1 vs 1,6±0,2), ambos p<0,05. A suplementação precoce de NAC em ratos DM reduziu a proteinúria (18,2±2,3), creatinina (1,5±0,1) e ureia plasmáticas (66,1±2,3) e atenuou os níveis de TBARS, no plasma, urina e tecido renal (2,6±0,1; 326,0±35,9 e 5,7±0,3), bem como causou aumento do clearance de creatinina (1,9±0,4), NO plasmático (59,8±5,2) e da eNOS (1,3±0,1), além da diminuição da iNOS (0,4±0,1), todos p<0,05. Esse tratamento precoce nos ratos DM também aumentou significantemente as defesas antioxidantes promovendo aumento da catalase (1,3±0,1 vs 0,7±0,1) e da glutationa (1,4±0,1 vs 0,9±0,1). No tratamento tardio com NAC em ratos DM, verificamos diminuição da proteinúria (32,6±6,0 vs 61,6±7,9) e da excreção de TBARS (284,8±26,0 vs 326,0±35,9) e aumento do clearance de creatinina (1,4±0,1 vs 0,7±0,1) e do NO plasmático (60,1±3,4 vs 41,4±2,3), sendo todos estatisticamente significantes. A análise histológica dos ratos diabéticos sem tratamento com NAC [DM(PRE) ou DM (TAR)] mostrou alterações tubulares importantes, tendo como as principais, degeneração das células tubulares, luz tubular dilatada, intensa degeneração glicosídica, além de expansão mesangial e discreta área de fibrose intersticial. Os animais do grupo DM+NAC (PRE) apresentaram também intensa degeneração glicosídica, entretanto não mostraram degeneração tubular e fibrose. Os animais que receberam NAC tardiamente mostraram intensa degeneração glicosídica, moderada degeneração das células tubulares para a luz e dilatação focal dos túbulos e não apresentavam fibrose. Conclusão xx O nosso estudo em ratos diabéticos evidenciou que a NAC protegeu contra a lesão renal, provavelmente devido ao controle do estresse oxidativo e / ou aumento da biodisponibilidade de NO, revelando que o tratamento precoce foi mais eficaz que o tardio, sugerindo que a NAC pode ser útil no tratamento coadjuvante de pacientes diabéticos no início da doença. Eventualmente o tratamento prolongado, mesmo que seja iniciado mais tarde, altere a história natural da doença, melhorando a sobrevida e a qualidade de vida de pacientes diabéticos.