Ação intrácrina da angiotensina II em células mesangiais: localização subcelular dos receptores AT1 e AT2 e comunicação mediada por exossomos - Novaes, Antonio da Silva [UNIFESP] (2016)
Introdução: Atualmente é discutida a relevância biológica do sistema reninaangiotensina (RAS) intracelular, responsável pela ação intrácrina da angiotensina II (Ang II). A presença dos receptores AT1 e AT2 no compartimento intracelular pode mediar efeitos não clássicos da Ang II, incluindo a regulação da expressão de genes alvo de Ang II, tais como citocinas pró-fibróticas. Os efeitos intrácrinos da Ang II podem ser mediados por transferência de peptídeos para outras células via exossomos. Objetivos: 1) avaliar a distribuição intracelular dos receptores AT1 e AT2 em células mesangiais humanas (CMH) e seu papel fisiopatológico no estímulo com alta concentração de glicose (AG); 2) testar a hipótese de que a sinalização exossomal pelas CMH é responsiva AG. Metodologia: A distribuição dos receptores AT1 e AT2 foi determinada por imunofluorescência em CMH intactas e em núcleos isolados. O peso molecular (PM) de ambos os receptores foi confirmado por Western Blotting (WB) em extrato proteico nuclear. A síntese intracelular de Ang II foi estimulada por AG e o efeito intrácrino da Ang II foi analisado na presença ou ausência de candesartan o qual discrimina os efeitos intra e extracelular da Ang II. O conteúdo exossomal de angiotensinogênio e renina foi analisado por WB. Exossomos obtidos de CMH controle (Ex-C) ou CMH estimuladas por AG (Ex-AG) foram usados para avaliar sua capacidade de modificar a função de CMH controle alvo. A expressão gênica (fibronectina e AGT), e proteica (AGT, renina, AT1, AT2), e a proliferação celular foram utilizadas para avaliar a funcionalidade da CMH. Resultados: AT1 e AT2 foram encontrados na membrana nuclear da CMH e em núcleos isolados. A análise por WB confirmou o PM de ambos os receptores. Ang II exógena marcada ligou-se a membrana nuclear. As células estimuladas por AG apresentaram níveis elevados de fibronectina e este efeito não foi inibido pelo candesartan, sugerindo um efeito intrácrino. O estímulo com AG induziu uma alteração na quantidade, mas não no tamanho dos exossomos. Exossomos derivados de CMH continham AGT e renina, e este conteúdo foi aumentado nos exossomos obtidos de CMH estimuladas por AG. A expressão de fibronectina, AGT renina, AT1 e AT2 foram maiores em CMH controle tratadas com Ex-AG comparada com Ex-C, indicando que os Ex-AG podem modificar a função de CMH normais. Conclusão: Os receptores AT1 e AT2 são ativos em CMH em cultura. Os exossomos derivados de CMH estimuladas com AG modificaram a função de CMH controle alvo, sugerindo que a comunicação intercelular através dos exossomos pode ter implicações fisiopatológicas na nefropatia diabética.