Estudo da reparação do nervo facial de ratos por células-tronco mesenquimais de polpa dental de dente decíduo exfoliado humano - Saez, Daniel Martinez [UNIFESP] (2017)
Avaliar a regeneração do nervo facial de ratos, após lesão por compressão e aplicação de células-tronco mesenquimais obtidas de polpa dental de dentes decíduos exfoliados humanos (SHED). Métodos: Utilizou-se 70 ratos machos Wistar distribuídos em dois grupos de estudo: Grupo I – lesão por compressão (controle positivo); Grupo II – lesão por compressão e SHED e distribuídos nos tempos de estudo de 03, 07, 14, 21 e 42 dias pós-operatórios. A hemiface direita, constituiu o Grupo Naive – nervo facial íntegro, como controle negativo. Após a cirurgia para lesão por compressão do tronco do nervo facial, o grupo II recebeu a aplicação de meio de cultura associado a SHED (5x105 células em 4 μL de DMEM). Nos tempos do estudo, os animais foram filmados por câmera digital, e os vídeos, analisados por três examinadores, que analisaram a recuperação funcional do nervo facial, por meio da observação do movimento de vibrissas usando uma escala arbitrária. Após eutanásia, o tronco e ramo bucal do nervo facial foram removidos, identificados e processados para Microscopia Eletrônica de Transmissão e Ensaios de Immunoblotting. Os resultados foram submetidos a testes estatísticos e considerados significativos os valores de p<0.05. Resultados: O método comportamental de movimento das vibrissas revelou que o grupo II teve recuperação funcional completa das vibrissas no tempo de 14 dias, enquanto o grupo I apresentou recuperação após seis semanas. Na análise histológica quantitativa do tronco do nervo facial não apresentou diferença estatística para o número de fibras mielinizadas entre os grupos. Para a espessura da bainha de mielina o grupo I mostrou valores estatisticamente superiores quando comparado ao grupo II, que apresentou valores estatisticamente superiores para os perímetros externo, interno e razão G quando comparado ao grupo I. Para o ramo bucal do nervo facial não foi observada diferença estatística para todos os parâmetros entre os grupos. Na análise histológica qualitativa, observou-se que o tronco do nervo facial do grupo II apresentou melhora histológica em comparação aos animais do grupo I, especificamente, no tempo de 07 dias, sendo observado um predomínio de fibras amielínicas e poucos axônios em degeneração, que revelaram uma desorganização estrutural das lamelas da bainha de mielina (aumento de 100.000X) e no tempo de 14 dias, sendo observado uma melhor organização axonal e estrutural da bainha de mielina. No ramo bucal, não houve diferença entre os grupos. No final do tratamento, o tronco e o ramo bucal do nervo facial apresentaram um maior número de fibras mielinizadas, com aspectos histológicos similares e bainhas de mielina espessas e estruturalmente organizadas, em todos os grupos. Quanto aos níveis de expressão do fator de crescimento neural, o grupo II mostrou valores estatisticamente superiores (p<0.05) quando comparado ao grupo Naive no tempo de 07 dias e, após seis semanas do tratamento, os grupos I e II aproximaram-se dos níveis expressos pelo grupo Naive. Conclusão: A utilização de SHED resultou em recuperações funcionais e histológicas melhores e mais precoces na regeneração do tronco do nervo facial de ratos Wistar com uma única aplicação após duas semanas de tratamento.