Polimorfismos genéticos em manchas de sêmen de indivíduos azoospérmicos – implicações médico-legais - Romero, Julianna Kesselring [UNIFESP] (2021)
Em casos de crime sexual onde não há um suspeito, é possível ser feita a determinação do perfil genético do material encontrado na vítima. O perfil genético obtido pode ser inserido no Banco de Perfis Genéticos para fins de comparações posteriores com os perfis de indivíduos suspeitos de outros crimes. Nesse contexto, avaliar STR autossômicos e STR de Y em células de diferentes origens (sangue, sêmen, células epiteliais) de um mesmoindivíduo é de extrema importância. Com exceção dos crimes em que ocorre o flagrante, a única maneira de se identificar o agressor sexual é a prova genética obtida de vestígios biológicos (sangue, sêmen, suor, saliva) deixados na vítima ou no local do crime, após comparação com um suspeito. Dessa forma, tornou-se indispensável a aplicação de técnicas de análise de DNA, obtenção de perfis genéticos, métodos comparativos e estatísticos, que permitem incluir ou excluir suspeitos, sendo muito bem aceitos nos tribunais. O objetivo desteprojeto foi avaliar perfis genéticos de DNA extraídos a partir de células de diferentes origensde um mesmo indivíduo armazenadas em forma de manchas. Além disso, avaliamos a degradação do DNA extraído dessas amostras. Material e Métodos: Foram avaliados DNAextraido de sangue e esperma pré e pós vasectomia, de 90 indivíduos do sexo masculino que doaram amostras, após consentimento livre esclarecido. Foram produzidas manchas contendo 30 µl de sêmen e fluido seminal em tecido de algodão que ficaram armazenados por 16 anos. Utilizamos o Quantifiler® Trio DNA, para quantificação e análise de degradaçãodo DNA e o PowerPlex ® Fusion 6C System que amplifica 27 loci STR e o PowerPlex ®Y23 System, especifico para 22 loci do cromossomo Y. As análises dos perfis genéticos foram realizadas pelo programa de computador Gene Mapper ID-X. Resultados e Discussão: Osresultados originados deste estudo foram enviados para o YHRD (YC000505). Os perfis genéticos dos 90 indivíduos foram totalmente amplificados nas amostras de manchas pré vasectomia e parcialmente pós-vasectomia, usando os dois sistemas multiplex. Os resultadosfornecem informações sobre manchas de sêmen de 0,25 cm2 em tecido de algodão de 90 indivíduos, relacionando concentração, degradação e análise de alelo. Ele também fornece uma compreensão das células presentes nas manchas de sêmen e as implicações de fatores individuais. Nas manchas de amostras pós-vasectomia a pequena quantidade de DNA foi um dos fatores limitantes, além da degradação. Foram avaliados o desempenho e a sensibilidadedos sistemas de amplificação utilizados na genotipagem de indivíduos azoospérmicos. Conclusões: Os perfis genéticos foram satisfatoriamente amplificados em amostras pré- vasectomia e parcialmente amplificados em amostras pós-vasectomia, armazenadas por quase duas décadas em temperatura ambiente em um país tropical. A pequena quantidade de DNA foi uma das limitações nas amostras de coloração pós-vasectomia, além da degradação e fragmentação. Não há publicações na literatura sobre análises do PowerPlex Fusion 6C e Y23 usando sangue, esperma e fluido seminal do mesmo indivíduo, muito menosna forma de manchas. Este estudo pode servir de referência para as análises de rastreamento de amostras armazenadas. Além disso, antecipa algumas questões sociais relacionadas à análise de amostras pós vasectomia em casos forenses, principalmente em crimes sexuais. Este estudo é pioneiro neste tipo de análise de forma sistemática, podendo ser utilizado como referência em amostras vestigiais armazenadas.