O papel dos receptores AT1 na hipertensão induzida por Angiotensina II: análise do perfil de ativação das vias de sinalização e dos complexos mitocondriais em células mesangiais; e avaliação da resposta pressórica e natriurética - de camundongos knockout para receptores AT1 no túbulo proximal - Leite, Ana Paula de Oliveira [UNIFESP] (2020)
A desregulação do Sistema renina angiotensina aldosterona é um dos fatores chaves na hipertensão arterial sistêmica (HAS). Os tratamentos com losartan, bloqueador do receptor AT1 além de melhorar diminuir a pressão arterial (PA) melhora as lesões de órgão alvo, entretanto em alguns pacientes, os efeitos do bloqueador não são tão eficientes. As células mesangiais glomerulares (CM) e o túbulo proximal são alvo da ação da angiotensina II (ANG II) e estão relacionados com lesão de órgão alvo em patologias como a HAS. O aumento da formação de ANGII nas CM pode causar lesão glomerular, promovendo o crescimento celular, hipertrofia e fibrose. Investigamos a sinalização de proteínas fosforiladas e as respostas mitocondriais à ANG II parácrina ou intracelular em CM de murinos (in vitro) e avaliamos a função renal do receptor AT1 em camundongos nocaute para este receptor no túbulo proximal (in vivo). Métodos: As CM foram cultivadas em meio DMEM e Ham's F-12, com 80% de confluência, carenciadas de soro fetal bovino. As células foram tratadas com ANG II na ausência ou presença de inibidores dos receptores AT1 (losartan) e/ou AT2 (PD 123319). As proteínas p-PKCα, p-ERK1/2, p38, p65 e p50 de NF-кB foram analisadas por Western Blotting (WB). As CM, foram submetidas ao processo de transfecção com vetores adenovirais que codificam uma proteína de fusão intracelular de ANG II, a mito-ECFP-ANG II, tratadas com Losartan ou com dupla transfecção com mito-GFP-AT2, para análise complexos mitocondriais proteicos I a V por WB. Os animais nocaute para o receptor AT1 no túbulo proximal e os animais selvagem, de ambos os sexos foram divididos em doze grupos (n=8/grupo), C57BL/6J (C57, selvagem) e mutantes (PT-AT1 -/-, PT). Esses aninais foram infundidos com ANG II por meio de bomba osmótica por 2 semanas (40 ng / min, i.p.), tratados simultaneamente com losartan (20 mg/kg/dia, v.o.) para estudar os papéis do AT1 extrarrenal e no túbulo proximal. Esses animais tiveram a PA verificada via caudal e submetidos a gaiola metabólica para a analise de Na+, Cl- e K+ na urina. Foi realizada a análise histológica do rim esquerdo de machos para observação da deposição de colágeno. A ANG II aumentou significativamente a expressão de p-ERK1/2, p-PKCα, p38 e NF-kb e essas respostas foram atenuadas pelo losartan e/ou PD123319. O mito-ECFP/ANG II aumentou o complexo proteico mitocondrial I a V, o qual foi atenuado pelo losartan ou pela expressão de receptores mito-AT2. A PA foi aproximadamente 13 ± 3 mmHg mais baixa nos camundongos PT-AT1-/- do que nos animais C57. A excreção (24 h) basal de Na+ (UNaV), K+ (UKV) e Cl- urinária (UClV) foi significativamente mais alta nos camundongos PT-AT1a-/- do que nos controles C57. As respostas pressoras frente à ANG II ocorreram de forma semelhante entre C57 e nocaute. Com relação as avaliações metabólicas, em animais C57, a ANG II promoveu a diurese, a ingestão de água, UNaV, UClV e UKV, sendo que a diurese foi atenuada pelo losartan sem alterar os níveis de ions. Já nos animais nocaute, a excreção basal de sódio foi maior do que nos animais C57, a infusão de ANG II promoveu diurese, mas menos que C57, aumentou da ingestão de água e promoveu UNaV, UClV e UKV, sendo que o losartan atenuou todas esses parâmetros. Não há diferenças significativas entre os sexos nas respostas pressoras e natriuréticas à ANG II em animais C57 e PT-AT1-/-. Com relação a deposição de colágeno, a lesão renal induzida por Ang II foi atenuado em camundongos PT-Agtr1a-/- comparado com C57. Em conjunto, temos in vitro que a ativação da ANG II intracelular ocorreu através da ação em ambos os receptores nas células mesangiais e na mitocôndria. E em in vivo, o presente estudo demonstra que a deleção dos receptores AT1a nos túbulos proximais do rim atenua hipertensão induzida por Ang II e lesão renal sem diferença significativa entre os sexos. Em conclusão, podemos afirmar que nos túbulos proximais, esta ação da ANG II na hipertensão e manutenção do equilíbrio hidroeletrolítico se dá principalmente através do AT1, já que na ausência deste receptor foi observada uma proteção renal frente aos efeitos deletérios da hipertensão.