Estudo da variabilidade genética na miopatia central core: aperfeiçoando o screening de mutações no gene RYR1 - Cuperman, Thais [UNIFESP] (2014)
Introdução: As miopatias com cores (MCC) têm como principal característica histopatológica a presença de cores, regiões de reduzida atividade oxidativa em fibras tipo I visualizadas na biópsia muscular. A MCC apresenta-se com fraqueza de predomínio proximal leve a moderada, hipotonia e atraso no desenvolvimento motor. A MCC está relacionada à ocorrência de Hipertermia Maligna (HM) e ambas são associadas a mutações no gene RYR1, que codifica o canal de liberação de cálcio denominado receptor de rianodina (RyR1). Atualmente, mais de 200 mutações no gene RYR1 já foram descritas. O diagnóstico definitivo de MCC deve ser realizado a partir de dados da história clínica, análise histopatológica, ressonância magnética e, mais recentemente, testes genéticos dos ?hot spots? do gene. No presente estudo avaliamos o teste Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) como um método alternativo simples, rápido e preciso para o screening de pacientes com diagnóstico histológico ou história familiar de MCC. Objetivo: Testar a técnica de MLPA para a realização de screening de pacientes com diagnóstico clínico e histológico de MCC e sua precisão para diagnosticar possíveis mutações no gene RYR1, comparando os resultados obtidos com a técnica rotineira de PCR e sequenciamento da região C-terminal do gene RYR1. Método: Foi utilizado banco de amostras de DNA de pacientes com diagnóstico histológico de MCC para realização de testes de MLPA e PCR com sequenciamento direto. Resultados: Dos 35 pacientes diagnosticados com MCC, 24 (68,6%) tiveram mutações detectadas por PCR e doze (34,3%) por MLPA, sendo que destes 8 foram confirmadospor sequenciamento direto. As mutações no exon 101 c.14582 G>A e c.14581 C>T foram as mais frequentemente encontradas pelos dois métodos. A mutação missense c.14256 A>C no exon 98 foi o polimorfismo mais frequentemente encontrado (seis pacientes). A mutação nova c.14411 A>C no exon 100 foi detectada por sequenciamento direto. Conclusão: O método de MLPA vem surgindo como um teste laboratorial alternativo, simples e de alto rendimento para auxiliar no screening de pacientes e familiares com suspeita de MCC, uma vez que a taxa de identificação das mutações responsáveis pela doença ainda é baixa devido à dificuldade de estudo do gene.