Variantes no gene GLA e o perfil enzimático da alfagalactosidase a em pacientes com suspeita de Doença de Fabry - Teixeira, Patricia Varela Lima [UNIFESP] (2019)
Objetivo: Analisar um banco de dados com resultado molecular e bioquímico de pacientes com suspeita de doença de Fabry. A partir desses resultados, avaliar a patogenicidade das variantes, bem como, realizar a caracterização in vitro de mutações inéditas, e por fim traçar o perfil enzimático dos diferentes genótipos a fim de avaliar o impacto dessas variantes na enzima. Métodos: Foram usadas ferramentas de bioinformática para analisar as variantes encontradas no gene GLA dos pacientes com suspeita de doença de Fabry. Os pacientes foram divididos de acordo com o genótipo que carregavam a fim de traçar o perfil enzimático e correlação com a patogenicidade. Para a caracterização in vitro, os experimentos foram conduzidos em células HeLa transitoriamente transfectadas com o GLA selvagem ou com os mutantes, por fim, a expressão do gene, bem como a atividade enzimática da α-Gal A foram mensuradas. Resultados: 215 homens e 48 mulheres apresentaram 103 variantes em regiões codificantes do GLA. Cinquenta e sete variantes já estavam previamente descritas como patogênicas na literatura. Dessas, onze foram descritas como variantes de efeito desconhecido (VUS do inglês variants of unknown significance) e as outras 35 são variantes inéditas, encontradas somente em um paciente e sem descrção prévia na literatura. Os outros pacientes apresentaram variantes em regiões não codificantes ou não apresentaram alterações no GLA. Das 35 variantes inéditas, 13 foram caracterizadas in vitro nesse trabalho. A patogenicidade foi confirmada nas variantes classificadas como patogênicas ou potencialmente patogênicas; nas variantes inéditas classificadas como VUS, a patogenicidade foi confirmada em três, as outras quatro não causam DF. O perfil enzimático revelou uma possível não patogenicidade das VUS, bem como das variantes encontradas em regiões não codificantes. Por fim, o estudo dos haplótipos formados por variantes em regiões não codificantes revelou uma frequência alta na população controle, similar a encontrada nos pacientes. Conclusão: A atividade enzimática em DBS foi marcadamente reduzida em pacientes com mutações descritas como patogênicas, bem como em variantes inéditas classificadas como patogênicas ou possivelmente patogênicas (com confirmação in vitro) quando comparados com indivíduos apresentando VUS, variantes em regiões não codificantes ou sem variantes, indicando um potencial não-patogênico destes últimos genótipos.