Análise do padrão de metilação das regiões line-1 de pacientes em primeiro episódio psicótico

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Marques, Diogo Ferri [UNIFESP]
• Orientador(a): Belangero, Sintia Iole Nogueira [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001jfr2
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Line-1; Metilação; Resposta ao tratamento; Psicose; Esquizofrenia
• Palavras-chave em Inglês: Line-1; Methylation; Response to treatment; Psychosis; Schizophrenia
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=6362940; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/52724

A esquizofrenia é caracterizada principalmente pela psicose (sintomas positivos), como delírios e alucinações. O quadro pode ainda envolver sintomas negativos (como embotamento afetivo), além de prejuízos cognitivos. A etiologia da doença não é clara e a investigação de mecanismos epigenéticos pode ser um caminho para ajudar a esclarecer a fisiopatologia e a resposta ao tratamento de transtornos psicóticos. No genoma, regiões de repetição, incluindo a região LINE1 (long interspersed nuclear element1), são suscetíveis à metilação de sítios CpGs, e configuram um alvo para a avaliação dos padrões globais de metilação, já que representam aproximadamente 17% do genoma humano. Neste trabalho, a principal hipótese levantada é a de que pacientes em primeiro episódio psicótico (PEP) virgens de tratamento teriam uma hipometilação das regiões analisadas em relação a controles saudáveis e que, após o tratamento com risperidona, os padrões de metilação possam ser recuperados em indivíduos que responderam bem ao medicamento. Além disso, esperamos encontrar uma associação dos aspectos clínicos com a metilação de LINE1, de maneira que possamos, futuramente, utilizar os níveis de metilação como marcadores biológicos de predição de gravidade e de resposta. Neste contexto, o presente projeto se propôs avaliar a metilação de três sítios CpGs de LINE1 localizados na região promotora 5’UTR em sangue periférico de 76 pacientes em PEP virgens de antipsicóticos e 62 controles, a fim de compreender o papel da metilação global na fisiopatologia da esquizofrenia. Além disso, este projeto se propôs também avaliar possíveis alterações na metilação relacionadas ao tratamento com risperidona (antipsicótico atípico) por meio de um estudo longitudinal, acompanhando essas modificações nos pacientes pelo período de dois meses. Recentemente, LINE1 tem sido alvo de muitas pesquisas relacionadas com o neurodesenvolvimento. Alterações na sua metilação normalmente estão associadas à instabilidade genômica. Para a realização do estudo, iniciamos com a coleta de sangue dos indivíduos e, em seguida, com o isolamento do DNA que foi convertido utilizando o bissulfito de sódio. Neste método, o DNA tratado com bissulfito tem as citosinas não metiladas convertidas em uracilas enquanto que as citosinas metiladas não são modificadas quimicamente e permanecem como citosinas. Após a conversão, os fragmentos de LINE1(146 pb) contendo três CpGs são amplificados por meio de PCR convencional e, posteriormente, são sequenciados utilizando a técnica de pirosequenciamento. O pirosequenciamento consiste em registros de sinais luminosos por reações enzimáticas que geram picos proporcionais ao número de nucleotídeos incorporados na fita de DNA. Por fim, realizase a etapa de quantificação da metilação e, então, os níveis de metilação são comparados entre os grupos. Encontramos hipometilação nos pacientes em PEP em todas as regiões analisadas quando comparadas ao grupo controle, sugerindo que LINE1 possa estar associada à etiologia da psicose. Após análise pareada para comparar a metilação antes e após o tratamento, observamos que as médias de metilação subiram após o tratamento com a risperidona, embora não tenha sido estatisticamente significante. Outro resultado interessante foi a correlação positiva encontrada entre a região CpG1 de LINE1 e a resposta aos sintomas positivos dos pacientes em PEP tratados com risperidona, sugerindo que os nãorespondedores teriam hipometilação quando comparados aos respondedores, podendo ser, futuramente, um importante marcador biológico de predição de resposta a partir de mais estudos. Este trabalho trouxe, portanto, novos conhecimentos sobre a caracterização do padrão de metilação de sítios CpGs de LINE1 em pacientes em PEP, correlacionando os níveis de metilação com aspectos clínicos.