Pesquisa de mutações em pacientes com Glomeruloesclerose Segmentar e Focal Familiar ou Síndrome Nefrótica Esteroide Resistente - Riguetti, Michelle Tiveron Passos [UNIFESP] (2016)
Introdução A glomeruloesclerose segmentar e focal (GESF) e a síndrome nefrótica esteroide resistente (SNER) podem ser causadas por mutações em diversos genes que codificam proteínas fundamentais para garantir a integridade e funções dos podócitos. Mutações no gene NPHS2 causam SNER autossômica recessiva com apresentação dos sintomas sobretudo na infância, enquanto que os genes ACTN4, INF2 e TRPC6 estão relacionados com a forma autossômica dominante da doença com início frequentemente na adolescência ou começo da idade adulta. Objetivos Este estudo teve por objetivos implantar a metodologia e realizar a pesquisa de mutações nos genes NPHS2, ACTN4, INF2 e TRPC6 em pacientes com GESF familiar ou SNER em nosso Serviço. Material e Métodos Foram incluídos neste estudo seis pacientes-índice e seus familiares, totalizando 15 indivíduos. Os pacientes-índice tinham diagnóstico de GESF à biópsia renal ou SNER (3 eram do sexo masculino e 3, feminino, com idades médias de 30,7 ± 16,7 anos e por ocasião do diagnóstico de 17 ± 14,9 anos). Todos foram esteroide resistentes. O DNA genômico foi isolado de linfócitos de sangue periférico usando DNAzol® (Invitrogen). A amplificação de todos os éxons dos genes ACTN4, INF2, NPHS2 e TRPC6 x foi realizada através da reação de polimerase em cadeia (PCR), usando Taq polimerase e primers de oligonucleotídeos previamente desenhados. Os produtos da PCR foram purificados e o DNA foi sequenciado usando o kit BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing (Applied Biosystems). Resultados Foram encontradas mutações em cinco dos seis pacientes-índice e em seus familiares. O polimorfismo R229Q no gene NPHS2 foi encontrado junto à mutação S313L no gene NPHS2, às mutações P316S no gene NPHS2 e G894S no gene ACTN4, e à mutação R291W também no gene NPHS2. Também foi detectado isoladamente o polimorfismo A404V no gene TRPC6 nos três membros de uma família. O polimorfismo rs10133301 do gene INF2 foi encontrado em cinco dos seis pacientes-índice. Conclusões Foi possível implantar em nosso Serviço a metodologia para pesquisa de mutações nos genes NPHS2, ACTN4, TRPC6 e INF2 relacionados com GESF familiar e SNER, padronizar a metodologia e aplicá-la no estudo de 15 indivíduos integrantes de seis famílias com tais doenças. As mutações no gene NPHS2 foram mais comuns, assim como a presença do polimorfismo R229Q (que associado a uma mutação leva à maior gravidade e progressão para doença renal crônica terminal) nesse grupo de pacientes. Duas das mutações encontradas no gene NPHS2 (S313L e P316S) não haviam sido descritas anteriormente.