Avaliação do efeito da riboflavina e luz ultravioleta sobre os ceratócitos e luz ultravioleta sobre os ceratócitos in vitro - Covre, Joyce Luciana [UNIFESP] (2013)
Objetivo: Obter cultura de ceratócitos humanos quiescentes e avaliar o efeito da aplicação da luz UVA e riboflavina sobre ceratócitos da córnea humana in vitro. Methodos: Os ceratócitos foram obtidos a partir das rimas corneoesclerais remanescentes da trepanação de córneas previamente utilizadas em cirurgias de transplante de córnea no Centro Cirúrgico do Departamento de Oftalmologia da EPM/UNIFESP, e cultivadas em meio DMEM/F12 com 2% de FBS até atingir confluência. As culturas de células foram caracterizadas por imunofluorescência com os anticorpos K3 (marcador de células epiteliais), Thy-1 (marcador de fibroblasto) SMA (marcador de miofibroblasto) e Lumican (marcador de ceratócitos). Imunoflurescência também foi feita após o tratamento. As células do estroma da córnea foram cobertas com colágeno (200?L e 500 ?L) e 0,1 % de riboflavina e exposta a luz UVA a 370nm por 30 minutos. Após 24 horas, citotoxicidade foi determinada por ensaio de MTT e a viabilidade celular foi feita por Hoechst 33342/Iodeto de propideo. Resultados: As culturas de células atingiram confluência em aproximadamente 20 dias. Imunofluorescência apontou alta expressão para o marcador de ceratócitos (Lumican) e expressão negativa par os marcadores de células epiteliais (K3), fibroblasto (Thy-1) e miofibroblasto (?-SMA). Após o cross linking a análise de MTT mostrou baixa taxa de toxicidade e com a coloração de Hoechst 33342/Iodeto de propideo baixa taxa de apoptose e necrose respectivamente em todos os grupos que continham colágeno. Conclusão: As culturas de ceratócitos foram obtidas e caracterizadas por imunofluorescência através do marcador Lumican com sucesso. O ensaio de MTT e a coloração por Hoechst 33342 e iodeto de propídio, apresentaram maior índice de morte celular nos grupos que não continha colágeno, provando que protege as células contra os efeitos da luz UVA.