Estudo in vitro da apoptose induzida em linfócitos de camundongos BALB/c imunizados com o peptídeo sintético anti-carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus (SBm7462) por via oral e nasal - Carvalho, Gabriel Domingos (2008)
Com o objetivo avaliar a resposta imune de camundongos BALB/c imunizados por via oral e nasal com o peptídeo sintético anti-carrapato R. (B.) microplus SBm7462 e estudar a indução da AICD dos linfócitos T de memória dos animais imunizados, utilizou-se 80 camundongos BALB/c, divididos em quatro grupos experimentais com 20 animais cada (grupo I: imunização por via oral; grupo II: imunização por via nasal; grupo III: animais não imunizados; e um grupo de animais doadores de macrófagos peritoneais). Foram feitas duas imunizações, com intervalo de 21 dias. Aos nove e 15 dias após a primeira e segunda imunização realizou-se as coletas, separadamente para cada grupo, e os linfócitos T isolados foram cultivados em estufa, 5% de CO2 a 37ºC, por 10 dias na presença de 1μg de SBm7462 e APCs. Posteriormente, adicionou-se os diferentes agentes indutores (mitramicina e CHX) ou inibidores (DBR e CsA) de apoptose, subdivididos em tratamentos distintos. Após o período de incubação específico para cada um dos tratamentos, determinou-se a porcentagem de viabilidade celular pela exclusão pelo Azul de Tripan e a porcentagem de células apoptóticas pela coloração com Laranja de Acridina e pela técnica de TUNEL. A natureza específica dos linfócitos T foi confirmada pelo aumento no número de células após re-estimulação in vitro com SBm7462, os quais se comportaram como linfócitos T de memória. Ocorreu indução da AICD por inibição da expressão do c-myc e por aumento da expressão de Fas e a AICD induzida pelo peptídeo sintético SBm7462 foi mediada por uma via independente da calcineurina e da cinética de regulação do FasL. As vias de mucosa, oral e nasal, podem ser consideradas vias alternativas para a imunização com o peptídeo sintético SBm7462, porém requerem um maior número de doses para induzir uma resposta com altos níveis de imunoglobulinas.