Determinação do conteúdo de DNA em pimentão (Capsicum annuum L.) por citometria de imagem - Mendonça, Maria Andréia Corrêa (2006)
Capsicum é um dos gêneros mais importantes economicamente da família Solanaceae. Das 25 espécies descritas, cinco são extensivamente cultivadas. Capsicum annuum é a mais importante comercialmente, pelo seu valor agronômico como especiaria. Apesar da sua importância, valores de conteúdo de DNA conflitantes, que variam de 5,52 a 10,80 pg, têm sido descritos para essa espécie. Diante dos avanços dos equipamentos digitais nas análises de citometria de imagem, o presente trabalho propôs o estabelecimento desses recursos para reavaliar o tamanho do genoma em C. annuum. Os objetivos específicos foram: (i) o estabelecimento de parâmetros de confiabilidade para análises em citometria de imagem, por meio da realização de testes de estabilidade do equipamento, linearidade e uniformidade da densidade óptica integrada dos núcleos; (ii) aplicação dessa calibração em núcleos de eritrócitos de Gallus domesticus Leghorn (macho e fêmea); e (iii) desenvolvimento de metodologias de citometria de imagem para determinação do conteúdo de DNA em pimentão (C. annuum L. Fortuna Super ). Lâminas de esfregaço de sangue de galinha e galo submetidas à reação de Feulgen foram utilizadas nos testes de calibração e para a determinação da densidade óptica integrada. As preparações citogenéticas de pimentão foram feitas pela técnica de esmagamento de meristemas radiculares submetidos à reação de Feulgen. Uma vez estabelecidos os parâmetros de confiabilidade para a realização da citometria de imagem, a aplicação dessas padronizações em análises de núcleos de eritrócitos de ave permitiu identificar diferenças de 4,32% no conteúdo de DNA nuclear entre machos e fêmeas de G. domesticus. Análise de variância demonstrou que a diferença encontrada era significativa, e essa foi atribuída ao heteromorfismo dos cromossomos sexuais. As análises de citometria de imagem em C. annuum permitiram o cálculo da densidade óptica integrada, atendendo aos parâmetros internacionalmente adotados para esse tipo de estudo. O conteúdo de DNA estimado para C. annuum Fortuna Super , utilizando Pisum sativum Ctirad com o padrão interno, foi de 8,10 pg. Esse valor difere em 2% do obtido previamente por citometria de fluxo, utilizando-se material nuclear foliar da mesma população de plantas. Além disso, o valor obtido difere em 16% e 28% dos valores 2C obtidos por citometria de imagem descritos na literatura e em 7% e 32% dos relatados por citometria de fluxo. Esses resultados abrangem informações acerca do genoma dessa espécie, que podem ser úteis em programas de melhoramento e seqüenciamento e em estudos evolutivos.