Transferência gênica mediada por espermatozoides bovinos associados a vetores lentivirais - Lemos, Diana Rangel de (2020)
Para otimização da produção de embriões bovinos geneticamente modificados (GMs) foi avaliada a possibilidade de produção in vitro (PIV) utilizando espermatozóides como carreadores de vetores lentivirais (VLs), visto que não consta na literatura relatos utilizando essa estratégia em bovinos. Foram avaliados a produção de embriões GMs com o transgene da proteína verde fluorescente (GFP) e posteriormente com o gene do fator IX de coagulação humano (FIX) como modelo de proteína recombinante humana (PRH), devido à importância desta proteína para pacientes com hemofilia B. Foi confirmada a expressão do GFP em células HEK e MDBK, após transdução das partículas, entretanto não foi possível realizar a seleção das células transduzidas. O mesmo resultado foi encontrado em fibroblastos transduzidos com o transgene FIX. A produção in vitro de embriões co-incubados com VLs durante a fertilização in vitro (FIV) prejudicou a taxa de clivagem e consequentemente a de produção de embriões. Já quando a co-incubação ocorreu durante o cultivo in vitro (CIV) não houve diferença estatística (p>0.05) nas taxas de desenvolvimento embrionário entre os tratamentos estudados. Apesar das células do cumulus terem expressado o GFP após incubação com os lentivírus, o mesmo não foi observado nos embriões. Esse resultado foi confirmado a partir da extração do DNA, que demonstrou ausência de inserção dos transgenes do GFP e FIX, o que diferiu de resultados encontrados em estudos similares. Dessa forma, os VLs estudados foram capazes de transfectar as células do cumulus, demonstrando sua eficiência na transdução de células somáticas, entretanto, não houve a produção de embriões geneticamente modificados a partir da co-incubação dos VLs com espermatozóides bovinos. Palavras-chave: Espermatozóides. Vetores lentivirais. Transferência gênica. Proteínas recombinantes humanas