Purificação e caracterização de uma β-xilosidase do fungo fitopatogênico Ceratocystis fimbriata RM 35 - Coura, Roberta Ribeiro (2012)
Os objetivos deste trabalho foram cultivar o fungo fitopatogênico Ceratocystis fimbriata RM 35 para produção de β-xilosidases, purificar e caracterizar esta enzima, visando sua aplicação em processos industriais de branqueamento de polpa de celulose, produção de biocombustíveis, e na produção de xilitol, utilizado na indústria alimentícia e na área odontológica e médica. Para produção da β-xilosidase extracelular, o fungo foi cultivado por 168 h em meio mineral contendo farelo de trigo como fonte de carbono. Após este período, o meio foi filtrado, centrifugado e utilizado como fonte de enzimas β-xilosidases. A enzima foi purificada por cromatografias de troca iônica, filtração em gel e eletroforese em gel de poliacrilamida, sob condições não desnaturante. Ao final do processo de purificação, a β-xilosidase apresentou um fator de purificação de 18,29 vezes, com um rendimento de 22,5 %. A massa molecular da enzima foi de aproximadamente 161,6 kDa, quando estimada por SDS-PAGE, e de aproximadamente 204,2 kDa, quando estimada por filtração em gel. A enzima apresentou atividade máxima em pH 3,9 e na temperatura de 65 °C, sendo estável na temperatura de 60 °C por 24h. Os valores de KM e Vmax, utilizando o substrato ρ-NP-βXil, foram 0,326 mM e 0,91x10-3 mM/min, respectivamente. A enzima apresentou atividade muito reduzida com o substrato sintético ρ-nitrofenil-β-glicopiranosídeo. A atividade enzimática foi parcialmente inibida por sulfato de cobre II, cloreto de alumínio III, SDS e xilose, todos nas concentrações finais de 1 e 10 mM. C. fimbriata é um fungo fitopatogênico e encontrada causando doenças em diversas culturas de grande valor econômico. Assim, a caracterização bioquímica e cinética de β-xilosidase, e a avaliação dos potenciais para aplicação dessas enzimas, pode ser uma alternativa promissora e econômica para melhorar a qualidade de processos industriais da produção de xilitol, do branqueamento de polpa de celulose e da produção de biocombustíveis, além de um passo importante na elucidação da interação planta-patógeno, no desenvolvimento da doença causada por este fungo.