Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2002
Autor(a) principal: Nakamune, Ana Claudia de Melo Stevanato
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: [s.n.]
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Glândulas salivares
Glândula parótida
Link de acesso: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1592362
Resumo: Orientadores: Jose Mauro Granjeiro, Eulazio Mikio Taga
id UNICAMP-30_28744f4a9f63946139cfc54c26d6f6cd
oai_identifier_str oai::243168
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovinaGlândulas salivaresGlândula parótidaOrientadores: Jose Mauro Granjeiro, Eulazio Mikio TagaTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: A arilsulfatase A de parótida bovina foi purificada 6.614 vezes, até homogeneidade, através de fracionamento com sulfato de amônio, precipitação ácida, precipitação cetônica, cromatografia de troca iônica (DEAE-Sephadex A50) e cromatografia de exclusão molecular (Sephacryl S-200). O rendimento obtido foi de 35,1% e a atividade específica foi de 79,4 UElmg. A pureza da enzima foi comprovada através de eletroforese em condição nativa (PAGE) e desnaturante (SDS-PAGE), e cromatografia de exclusão molecular (Sephacryl S-200). Como determinado através de filtração em gel e SDS-PAGE, a enzima apresentou uma Mr de 135,0 e 60,5 kDa, respectivamente. Os estudos cinéticos demonstraram que a temperatura ótima para a enzima é de 40°C e que a 70°C e 20°C, existia atividade enzimática residual de 28,5% e 44,0 %, respectivamente. Quanto ao pH ótimo, foi observado um platô entre o pH 4,5 e o pH 5,5. A KM obtida para o p-NCS foi de 1,1 mmol L-1, a VMax 241,6 IJmol min-1, a constante catalítica 806,0 S-1 e a energia de ativação 13,583 kcal rroI-1. A enzima foi fortemente inibida por prata (Ki 0,4x10-6 moi L-1) e fosfato (Ki 2,95x10-6 moi L-1), mas insensível ao bário, chumbo, cl o reto , nitrato e sulfatoAbstract: Arylsulfatase A from bovine parotid was purified 6,614-fold to homogeneity, by procedures involving ammonium sulfate fractionation, acid treatment, acetone preciptation, DEAE-Sephadex ion-exchange chromatography and Sephacryl S-200 gel filtration. The enzyme recovery was 35.1 % and specific activity 79.4 units per mg protein. The following homogeneity criteria were used: PAGE, SDS-PAGE and gel filtration on Sephacryl-S200. The relative molecular mass of 135.0 (dimer) and 60.5 kDa (monomer) were determined by gel filtration chromatography and SDSPAGE, respectively. Kinectic studies showed an optimum temperature of 40° C, and a broad optimum pH between 4.5-5.5. The I<M value of 1.1 mmol L -1 was obtained, a VMax 241.6 IJmol L-1, and kcat 806.0 S-1 for p-NCS and activation energy 13.583 kcal mor1. The enzyme was inhibited by silver (Ki 0.4x10-6 moi L-1) and phosphate (Ki 2.95x10-6 moi L-1) but was not inhibited by barium, lead, nitrate and sulfateDoutoradoBioquímicaDoutor em Biologia Funcional e Molecular[s.n.]Granjeiro, Jose MauroTaga, Eulazio MikioSassaki, Kikue TakebayashiCiancaglini, PietroOgo, Satie HatsushikaMarangoni, SergioUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação não informadoUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASNakamune, Ana Claudia de Melo Stevanato20022002-07-17T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf79p. : il.(Broch.)https://hdl.handle.net/20.500.12733/1592362NAKAMUNE, Ana Claudia de Melo Stevanato. Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina. 2002. 79p. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1592362. Acesso em: 27 fev. 2025.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/243168porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T03:36:43Zoai::243168Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T03:36:43Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina
title Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina
spellingShingle Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina
Nakamune, Ana Claudia de Melo Stevanato
Glândulas salivares
Glândula parótida
title_short Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina
title_full Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina
title_fullStr Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina
title_full_unstemmed Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina
title_sort Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina
author Nakamune, Ana Claudia de Melo Stevanato
author_facet Nakamune, Ana Claudia de Melo Stevanato
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Granjeiro, Jose Mauro
Taga, Eulazio Mikio
Sassaki, Kikue Takebayashi
Ciancaglini, Pietro
Ogo, Satie Hatsushika
Marangoni, Sergio
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
Programa de Pós-Graduação não informado
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Nakamune, Ana Claudia de Melo Stevanato
dc.subject.por.fl_str_mv Glândulas salivares
Glândula parótida
topic Glândulas salivares
Glândula parótida
description Orientadores: Jose Mauro Granjeiro, Eulazio Mikio Taga
publishDate 2002
dc.date.none.fl_str_mv 2002
2002-07-17T00:00:00Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv (Broch.)
https://hdl.handle.net/20.500.12733/1592362
NAKAMUNE, Ana Claudia de Melo Stevanato. Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina. 2002. 79p. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1592362. Acesso em: 27 fev. 2025.
identifier_str_mv (Broch.)
NAKAMUNE, Ana Claudia de Melo Stevanato. Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovina. 2002. 79p. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1592362. Acesso em: 27 fev. 2025.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1592362
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/243168
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
79p. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1829137425322999808

Registros relacionados