Padronização de ensaio ELISA “in house” para diagnóstico de leishmaniose em equinos e caninos - Pradella, Gabriela Döwich (2021)
As leishmanioses são doenças causadas pelo protozoário Leishmania spp. e estão distribuídas globalmente. Na América do Sul, o Brasil concentra o maior número de casos de leishmaniose visceral e cutânea em humanos. No estado do Rio Grande do Sul, na região da fronteira Oeste, é descrita a presença do flebotomíneo vetor e, também, a infecção em humanos, caninos e equinos. O cão doméstico é o principal reservatório nas zonas urbanas, entretanto, a participação dos equinos na manutenção do parasito vem sendo discutida. Diferentes técnicas diagnósticas estão disponíveis para identificação tanto do agente quanto da resposta imunológica do indivíduo. O teste de ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) permite a identificação da resposta imune por meio da ligação antígeno anticorpo. Em 2011, foi definido como teste confirmatório para Leishmaniose visceral canina (LVC) pelo Ministério da Saúde. Tendo em vista a importância da Leishmaniose em cães no município de Uruguaiana e, a necessidade de estudos referentes à manutenção da doença e possíveis reservatórios, o presente trabalho teve por objetivo a padronização de um protocolo “in house” de ELISA indireto para detecção de resposta imunológica contra Leishmania spp. nas espécies canina e equina, bem como a avaliação sorológica de amostras provenientes dos municípios de Uruguaiana e Barra do Quaraí-RS. Inicialmente, foram padronizados os protocolos para o cultivo de Leishmania no laboratório. As cepas de Leishmania infantum, espécie utilizada como antígeno, foram disponibilizadas pela FRIOCRUZ/RJ. A fixação do antígeno foi realizada utilizando as formas promastigotas do parasito, sendo que, a concentração de 10ug/ml demonstrou melhores resultados. O protocolo de ELISA utilizado para as espécies equina e canina foram iguais. O teste das diluições do anticorpo primário variou entre as espécies: para equinos foram utilizadas as concentrações 1/100, 1/200, 1/400, 1/800 e 1/1000; e para caninos 1/100, 1/400 e 1/800. As concentrações de anticorpo secundário utilizadas nos testes foram de: 1/5000 e 1/10000 para equinos e caninos. Após a padronização, foram realizados os testes sorológicos em amostras provenientes de caninos e equinos dos municípios de Barra do Quaraí e Uruguaiana. Foram testados 51 cães e 159 equinos. Dentre os 51 caninos testados, 17 (33%) foram positivos na técnica de ELISA sendo que, 16 destes foram também positivos no teste imunocromatográfico DPP®. Referente aos equinos testados, 159 animais, 16 (10%) foram positivos no ELISA. Com isso, pode-se concluir que, foi possível a padronização de um protocolo de ELISA indireto “in house” para diagnóstico da leishmaniose em equinos e caninos e, a presença de animais positivos demonstra que há circulação da doença na população estudada.