Caracterização da interação dos bacteriofagos T4, M13, e MS2 com células epiteliais prostáticas tumoriais (LNCaP e PC3): ativação das vias de proliferação, sobrevivência e morte celular. - Sanmukh, Swapnil Ganesh [UNESP] (2018)
O câncer de próstata (PCa) é o segundo tipo de câncer mais frequente e tem a segunda maior taxa de morbidade e mortalidade entre os homens. A cultura de células prostáticas LNCaP e PC3 tem sido utilizada para investigar possíveis alvos e vias de sinalização celular importantes para o crescimento e progressão do CaP. Trabalhos anteriores do nosso laboratório demonstraram que a presença de fibronectina no meio de cultura altera significativamente o padrão de expressão gênica dessas células. Também, bacteriófagos recentemente usados como agentes terapêuticos no tratamento de vários tipos de câncer, diretamente ou portadores de moléculas antitumorais, incluindo câncer de próstata, foram relatados. Estudos anteriores mostraram que bacteriófagos podem interagir com proteínas de membrana de células de mamíferos, incluindo integrinas que reconhecem sequências de RGD em proteínas virais, bem como fibronectina e outras moléculas da matriz extracelular. O objetivo deste projeto foi caracterizar a interação de três bacteriófagos com as duas linhagens celulares epiteliais prostáticas LNCaP e PC3. Estas duas linhas celulares foram cultivadas em seus meios de cultura, nos quais foram adicionados bacteriófagos com concentrações definidas. As células foram coletadas após 24 horas de tratamento. A expressão gênica de genes relacionados as vias integrinas ITGA5, ITGAV, ITGB1, ITGB3, ITGB5, AKT, PI3K, MAPK1, MAPK3, HSP27, HSP90, receptor de androgênio AR, STAT3, PGC1A foi analisada por qPCR. A ativação da via AKT/PI3K foi analizada também por western blotting. Celulas PC3 foram expostas aos bacteriófagos T4 e M13 e foram analisadas por microscopia de luz convencional e por microscopia de varredura. Nas células LNCaP, o bacteriófago M13 regulou negativamente genes ITGA5, ITGAV, ITGB1, ITGB3, ITGB5, MAPK1, MAPK3, HSP90, TBP, PSA e positivamente genes AKT, PI3K, HSP27, AR, STAT3, PGC1A genes; o bacteriófago MS2 regulou negativamente genes ITGA5, ITGAV, ITGB3, ITGB5, MAPK1, MAPK3, HSP90, PI3K, PSA e positivamente genes ITGB1, AKT, HSP27, AR, TBP, STAT3, PGC1A genes; o bacteriófago T4 regulou negativamente genes ITGA5, ITGB3, ITGB5, HSP27, HSP90, TBP, PGC1A, PSA e positivamente genes ITGB1, ITGAV, AKT, PI3K, AR, MAPK1, MAPK3, STAT3 genes. Já para as células PC3, os bacteriófagos M13 e T4 regularam negativamente genes HSP27, HSP90, AR e positivamente os genes ITGA5, ITGAV, ITGB3, ITGB5. Microscopicamente foi possível observar a interação dos bacteriófagos T4 e M13 com a superfície celular das células PC3 e que está interação com o bacteriófago M13 reduz a migração celular. Nossos resultados sugerem que os 3 bacteriófagos poderm alterar a expressão de genes relacionados à adesão e proliferação celular, de uma maneira célula específica e podem funcionar como nanopartículas com potencial terapêutico para o tratamento de diferentes tipos de câncer, incluindo o câncer de próstata.