Recombinant phospholipase A1 from Polybia paulista wasp venom for molecular diagnosis of allergy - Pérez-Riverol, Amilcar [UNESP] (2017)
A fosfolipase A1 é um dos principais alérgenos identificados no veneno do Polybia paulista (Hymenoptera: Vespidae), uma vespa social de elevada importância clínica no sudeste do Brasil. A produção recombinante deste alérgeno contribuirá com o desenvolvimento do diagnóstico molecular de alergia. Neste trabalho é descrita a produção recombinante da fosfolipase A1 de P. paulista (rPoly p 1) no sistema celular Escherichia coli. Elevados níveis da rPoly p 1 na forma insolúvel foram obtidos após expressão na bactéria. A otimização das condições de solubilização permitiu incrementar os níveis de recuperação do alérgeno recombinante. A rPoly p 1 foi purificada (99%) até homogeneidade mediante cromatografia de afinidade em coluna de Ni2+, mostrando valores de rendimento finais de 1.5 g/L de meio de cultura. A forma nativa do alérgeno (nPoly p 1) foi purificada mediante cromatografia de troca catiônica. A rPoly p 1 foi reconhecida pela IgE específica de soros de pacientes sensibilizados ao veneno de P. paulista. O uso da rPoly p 1 permite diferenciar a ocorrência de real dupla sensibilização ao veneno de vespa e formiga ou vespa e abelha da incidência de reatividade cruzada. Soros de pacientes com IgE específica ao veneno de abelha e formiga não reagiram com a rPoly p 1, enquanto que soros de camundongos sensibilizados com rPoly p 1 apresentaram reatividade cruzada exclusivamente com fosfolipases A1 (PLA1) de vespas Neotropicais ou de climas temperados. O alinhamento múltiplo do modelo 3-D da rPoly p 1 sugere que a base molecular desta reatividade é a presença de epitopos lineares e conformacionais compartilhados pelas PLA1s das espécies avaliadas. A presença de CCDs no veneno de varias espécies de vespas Neotropicais foi também analisada. Os resultados apresentados nesta Tese indicam que a rPoly p 1 pode ser utilizada no diagnostico molecular de alergia a veneno de P. paulista. O uso da rPoly p 1 ira a melhorar à identificação específica de veneno responsável pela sensibilização primaria e por tanto o desenho da imunoterapia.