Identificação de perfis diferenciais de metilação do DNA na endometriose - Zimbardi, Daniela [UNESP] (2010)
A endometriose constitui uma doença de etiologia incerta, caracterizada pela presença de tecido endometriótico fora da cavidade uterina. E uma causa comum de morbidade, atingindo 5 a 10% das mulheres em idade reprodutiva. A metilção anormal na região promotora de genes especificos e os niveis de expressão alterados das DNA metiltransferases (DNMTs) compoem 0 conjunto de evidencias recentes indicando a endometriose como uma doença epigenetica. 0 presente estudo propos a investigaçao do perfil diferencial de metilaçao do DNA na endometriose, utilizando uma abordagem genomica de alta resoluçao baseada na metodologia de microarrays. Para isso, foram coletadas amostras pareadas de endometrio eutópico e de endometriose intestinal profunda de 18 pacientes. Foram selecionadas dez amostras pareadas para a hibridação do DNA: cinco casos foram submetidos ao enriquecimento das sequencias não metiladas (digerido com a enzima de restrição dependente de metilação McrBC ) e nove ao enriquecimento das sequencias metiladas (digerido com 0 coquetel de enzimas sensiveis a metilação do DNA Acil, HinP11, HpyCH41Ve Hpall). Os ensaios foram realizados em duplicatas totalizando 28 hibridações independentes na plataforma disponivel comercialmente Human CpG Island ChIP-on-Chip Set 244K (Agilent Technologies). Este protocolo foi previamente padronizada utilizando-se 0 DNA das linhagens derivadas de carcinomas de c610n HCT116 e DKO (celulas HCT116 duplo knockout para as DNMT1 e DNMT3b) usando marcação reversa (dye swap). Os dados foram avaliados nos software Agilent Technologies Genomic Workbench (DNA Analytics 5.0) e GeneSpring 7.3 (Agilent Technologies). Estre os 925 genes que apresentaram metila9ao diferencial, 55 foram recorrentes em dois ou mais casos. Varios destes genes mostram-se interessantes por exercerem funções relacionadas a fatores de transcrição (MSX1, EMX2, HOXB13, HOXD8 e HOXD9)...