Avaliação de microRNA-140 em Vesículas extracelulares secretadas por células tronco mesenquimais derivadas de membrana sinovial equina - Pfeifer, João Pedro Hübbe (2021)
A função parácrina das células-tronco (MSCs) é desempenhada também por vesículas extracelulares (VEs). Assim, as VEs têm impacto funcional nas célulasalvo e nos mecanismos de controle de enfermidades por meio da entrega de microRNAs. A exemplo, na osteoartrite, em que a homeostase articular é regulada pelo microRNA-140. O objetivo deste trabalho foi caracterizar vesículas extracelulares (VEs) liberadas por células-tronco mesenquimais derivadas de membrana sinovial (eqSMMSC) e avaliar a expressão de microRNA-140 nas VEs e nas eqSMMSC em dois modelos de cultivo celular, além de, comparar a secreção de VEs e a expressão do microRNA-140 em ambiente inflamatório in vitro. Quatro grupos experimentais foram definidos. Grupos controle, um cultivo de eqSMMSCs 2D e um cultivo de eqSMMSCs 3D. Grupos induzidos, também divididos em 2D-OA e 3D-OA, porém foram expostos ao meio de cultivo simulando o ambiente inflamatório da osteoartrite “OA-Like” (IL-1β e TNF-α). Amostras dos meios de cultivo de todos os grupos foram coletadas após 24, 72 e 120 horas de incubação para isolamento e caracterização de VEs. O isolamento de VEs foi realizado com kit comercial pelo método de precipitação. A caracterização foi realizada pela NTA, MET e expressão de mRNA das tetraspaninas CD9, CD63 e CD81. A análise da expressão do microRNA-140 em VEs e células por RT-qPCR e do mRNA da ADAMTS5 também por RT-qPCR. As VEs puderam ser isoladas e caracterizadas em todos os grupos e momentos experimentais. A expressão do microRNA-140 nas eqSMMSCs, o grupo 3D-OA teve maior expressão em relação aos demais grupos nos momentos 24 h e em 72 h à ambos os controles e ao 2D-OA; no momento 120 h, houve maior expressão do grupo 3D em relação aos tratados 2D-OA e 3D-OA. Já a expressão do microRNA-140 nas VEs, destaca-se no momento 72 h, onde o grupo 3D teve expressão significativa em relação aos demais, e no momento 120 h, a expressão também significativa foi do 2D-OA em relação aos demais. Na análise 7 da expressão do mRNA ADAMTS5, pode-se destacar o momento 120 h, onde o grupo 3D-OA obteve maior expressão em relação aos controles 2D e 3D. Os dados obtidos apontaram que o modelo e as técnicas utilizadas foram eficazes para o isolamento e caracterização das VEs e para a identificação da expressão de microRNA nos diferentes grupos e momentos. A expressão do microRNA-140 em resposta ao ambiente inflamatório é desempenhada por eqSMMSCs, sendo que, em células 3D demonstrou-se ser rápida e em VEs oriundas de células cultivadas em 2D tardia.