Fotossensibilização de células derivadas dos carcinomas de orofaringe e mamário pela Eritrosina B: de efeitos moleculares em sistema modelos aos mecanismos de morte celular em ensaios in vitro - Bistaffa, Maria Julia [UNESP] (2022)
A fim de desenvolver terapias mais eficientes e menos invasivas no tratamento de tumores, a terapia fotodinâmica (TFD) tem ganhado destaque. Além da elucidação dos mecanismos de ação, os mecanismos subjacentes à oxidação lipídica em sistemas complexos, como as membranas plasmáticas, são importantes para eficiência da TFD. Contudo, ambos os mecanismos permanecem elusivos. Nesta dissertação de mestrado, investigamos através de filmes de Langmuir as interações moleculares que permitem a adsorção do FS eritrosina em monocamadas lipídicas e os resultados da fotooxidação subsequentes. Além disso, a eficiência fotodinâmica e os mecanismos de morte celular induzido pelo FS fotoativado em células derivadas do carcinoma de orofaringe (HEp-2) e mamário (MCF7) foram avaliados com citometria de fluxo e marcação de fluorescência. Os filmes de Langmuir foram inicialmente construídos com os fosfolipídeos 2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DOPC), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfo-L-serina (DOPS) e a mistura DOPC/DOPS, mimetizando membranas plasmáticas tumorais. Em um segundo momento, as monocamadas foram construídas com o extrato lipídico extraído das células MCF7. Os efeitos fotodinâmicos nas células MCF7 foram mais pronunciados do que nas células HEp-2. Em ambos os casos, a incubação da eritrosina não irradiada, não gera efeitos citotóxicos significativos, desencadeando apoptose no cultivo in vitro a partir de 24 h incubação. Por outro lado, a viabilidade celular é significativamente reduzida sob irradiação, desencadeando o mecanismo de morte celular por necrose. Modelos inspirados na membrana tumoral baseados em monocamadas de Langmuir mistas de DOPC e DOPS revelaram que interações eletrostáticas com a cabeça dos lipídeos são as principais forças de adsorção da eritrosina. Nas monocamadas construídas com extrato lipídico da MCF7, a adsorção da eritrosina é dirigida por interações secundárias que afetam a orientação dos grupos carbonil e a organização das cadeias lipídicas. A irradiação do FS nas monocamadas induz a hidroperoxidação lipídica, que pode ainda sofrer decomposição, resultando na clivagem da cadeia de fosfolipídeos e permeabilização da membrana. De fato, a clivagem lipídica, e os subprodutos gerados, foram detectados por espectroscopia de massa, sustentando o caminho necrótico de morte celular observadas nos ensaios in vitro.