Produção de enzimas despolimerizantes de material vegetal pelo fungo termofílico Rasamsonia emersonii S10 por cultivo em estado sólido - Rosa, Isabel Zaparoli (2018)
Os fungos termofílicos verdadeiros fazem parte de um grupo ainda não muito conhecido, sendo relativamente poucas as espécies descritas. Muitas das cepas consideradas termofílicas são na verdade termotolerantes, ou seja, apresentam maior crescimento em temperaturas mesofílicas, mas toleram temperaturas mais elevadas. O fungo Rasamsonia emersonii S10, recentemente isolado, apresenta um perfil termofílico verdadeiro, pouco comum, com crescimento em temperaturas ao redor de 60 °C. O presente trabalho buscou conhecer mais sobre as características de crescimento desse fungo e das enzimas extracelulares por ele secretadas quando em cultivos em substratos sólidos lignocelulósicos. Entre as enzimas testadas, endoglucanase, exoglucanase, β-glicosidase e β-xilosidase foram as que foram detectadas com as maiores atividades. Foram selecionadas as enzimas β-glicosidase e βxilosidase para estudos subsequentes, com cultivo do fungo em diferentes substratos, seguindo-se da purificação de ambas as enzimas e caracterização da β-glicosidase. As proteínas foram purificadas em coluna cromatográfica de troca aniônica. Ao final do processo, chegou-se a um fator de purificação de 11 e rendimento de 96% para a β-glicosidase. Estudos bioquímicos revelaram que as condições melhores para atividade da enzima foram pH 3,5 e temperatura de 70 °C. Essa enzima, quando em ausência de substrato, foi estável em estreita faixa de pH (5 a 8,5) e em temperaturas entre 45 a 75 °C. Os parâmetros cinéticos Km e Vmax obtidos através de ajuste não linear da curva foram similares para os substratos pNPG e pNPGal, sendo eles de 1,95 e 2,54 µmol/min.mL-1 e 31,53 e 31,42 mg/mL-1, respectivamente, e os valores calculados de kcat e da eficiência catalítica (kcat/km) foram respectivamente, de 163,63 e 102,79 s-1 e 83,77 e 40,46 mM-1s-1. A β-glicosidase purificada foi suscetível a todos os cátions, sendo que sua atividade residual foi mantida apenas até 25% em presença de Cd2+, Hg2+e K+, chegando a 5% e 0 em presença de Ag+ e Cu+2. As análises termodinâmicas indicaram que a 70 °C a enzima apresenta meia vida de 7 horas e necessita de 23,50 horas para redução de sua atividade a 10% do valor inicial.