Vitrificação de embriões bovinos produzidos in vivo e in vitro após lipólise química - Paschoal, Daniela Martins [UNESP] (2009)
O objetivo desta dissertação foi avaliar a viabilidade e a resistência à criopreservação após a realização de lipólise química utilizando-se o forskolin. Embriões Bos taurus indicus (OZ) e Bos taurus indicus X Bos taurus taurus (OMZT) produzidos in vitro, foram comparados em meio de cultivo contendo ou não soro fetal bovino (SFB). Para o experimento1, 1.052 oócitos de graus I e II foram colhidos de ovários de vacas Bos taurus indicus de abatedouro, dividindo em 7 réplicas. Os oócitos foram maturados em TCM 199 acrescido de SFB, Piruvato de Sódio, FSH, LH e Penicilina/Estreptomicina. A fertilização foi realizada com sêmen de touro Nelore (Bos taurus indicus) ou com sêmen de touro Simental (Bos taurus taurus), em meio HTF acrescido de BSA, Piruvato de Sódio, Cafeína, Heparina, Penicilinamina, Hipotaurina, Epinefrina e Penicilina/Estreptomicina. Os prováveis zigotos foram cultivados em meio SOFaa, acrescido de BSA, Piruvato de Sódio, Penicilina/Estreptomicina, suplementado ou não com SFB (Grupo 2,5%SFB e Grupo 0%SFB). No D6 os blastocistos foram novamente divididos em 2 sub-grupos com ou sem adição de 10μM de forskolin (total de 4 grupos - 2,5%SFB, 0%SFB, 2,5%+F e 0%+F). Para o experimento 2 os embriões foram expostos a solução de vitrificação 1 (SV1 = 5M de Etileno Glicol) durante 3 minutos e transferidos para uma gota com 15μL da solução de vitrificação 2 (SV2 = composta por 7M de Etileno Glicol, 0.5M de Galactose e 18% (w/v) de Ficoll 70) sendo, em seguida envasados em palhetas francesas estéreis de 0,25 mL. Para o aquecimento, as palhetas foram mantidas em ar por 8 segundos e depois em água a 37°C por 15 segundos. Como controle dos experimentos, embriões bovinos produzidos in vivo coletados de vacas Nelores foram utilizados. A taxa de clivagem e de produção de blastocisto no experimento 1, não diferiu entre os tratamentos dentro dos grupo...