Estudo do secretoma de biofilmes simples e mistos de Candida albicans e Staphylococcus aureus na resposta inflamatória e na expressão gênica de células displásicas de cavidade oral

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Dett, Freddy Humberto Marin [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Cândida albicans; Staphylococcus aureus; Biofilmes; Secretoma; TNF; IL-1β; BCL2; TP53; Biofilm; Secretome
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11449/313215

Os biofilmes são comunidades microbianas, que podem coexistir de forma sinérgica ou antagônica. Nos seres humanos, cerca de 80% dos processos infecciosos patogênicos estão relacionados ao desenvolvimento de biofilmes. Este trabalho tem como foco a espécie fúngica Candida albicans e a bactéria Staphylococcus aureus, ambos micro-organismos presentes em indivíduos saudáveis, que em determinadas condições clínicas, podem se tornar patogênicos, sobretudo na forma de biofilmes. Tais espécies são capazes de formar biofilmes de difícil controle e tratamento, sobretudo devido às interações moleculares e à produção de toxinas. Neste sentido, este projeto avaliou a ação biológica do secretoma, de biofilmes simples e mistos de C. albicans e S. aureus, usando também como ferramenta, mutantes de C. albicans com deleções em genes relacionados aos principais fatores de virulência deste fungo, a cepa ece1Δ/Δ, incapaz de secretar candidalisina, a cepa als3Δ/Δ, incapaz de produzir a adesina Als3p, e a cepa efg1Δ/Δ/cph1Δ/Δ, incapaz de formar hifas. Tais biofilmes foram formados por 36 horas e caracterizados, através da contagem de unidade formadoras de colônia (UFC/mL), quantificação de carboidratos, lipídeos e proteínas secretadas, avaliados morfologicamente por Microscopia de Fluorescência Confocal (CLSM) e por capacidade hemolítica. O secretoma, obtido dos diversos biofilmes deste estudo, foi utilizado para estimular as células THP-1 naive. Estas células foram avaliadas por CLSM, quanto à expressão de receptores de superfície do tipo CD86+ (fenótipo M1) e CD163+ (fenótipo M2) e quanto à produção das citocinas IL-8; IL-1β; IL- 6; IL-10; TNF e IL-12p70, por Citometria de Fluxo. Finalmente, o meio condicionado das células THP-1 estimuladas (mcTHP-1), foi utilizado para desafiar as células de displasia de cavidade oral, DOK, em relação à modulação da expressão gênica, (RT-qPCR), dos genes: TP53, HRAS, AKT, STAT3, BCL2, BRAF, mTOR e PI3KCA. Como resultados principais, evidenciamos que o secretoma do biofilme simples de S. aureus foi capaz de induzir a polarização das células THP-1 para um fenótipo CD86+, além de estimular a produção de TNF, IL-1β e IL-8 nestas células. Nos biofilmes mistos, tais capacidades de S. aureus foram abolidas por C. albicans, mecanismos parcialmente revertidos na presença do mutante als3Δ/Δ e totalmente revertidos na presença do mutante efg1Δ/Δ/cph1Δ/Δ; comprovando que C. albicans inibiu a antigenicidade do secretoma de S. aureus via Als3p e primordialmente através da formação de hifas. Além disto, o secretoma de S. aureus foi capaz, via modulação das células THP-1, de regular negativamente a expressão de TP53 e positivamente a expressão de BCL2, nas células DOK. Tal capacidade, novamente, foi inibida pela presença de C. albicans nos cultivos mistos com S. aureus, e discretamente revertida pelos mutantes als3Δ/Δ e efg1Δ/Δ/cph1Δ/Δ. Assim, este trabalho demonstra, pela primeira vez, a ação inibitória de C. albicans sobre S. aureus, na modulação da resposta inflamatória e na expressão de oncogenes. Este trabalho descreve que estes mecanismos estão atrelados à produção da adesina Als3p assim como à formação de hifas por C. albicans. Finalmente, este trabalho descreve a capacidade pró-inflamatória e pró-tumoral do secretoma de S. aureus.