Eficácia de compostos com alvos distintos no controle de biofilmes de Streptococcus mutans e Candida albicans

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Lobo, Carmélia Isabel Vitorino [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Biofilmes; Streptococcus mutans; Candida albicans; Biofilms
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/217612

A doença cárie é um problema de saúde pública mundial, causada por biofilme patogênico modulado por uma dieta rica em açúcares (principalmente, sacarose). A associação de Candida albicans e Streptococcus mutans tem sido encontrada em biofilmes de lesões clínicas de cárie da infância. O biofilme misto dessas duas espécies é mais tolerante à tratamentos tópicos com agentes que controlam e diminuiem a virulência de biofilme simples de S. mutans. Portanto, avaliou-se as atividades antimicrobiana, antibiofilme e citotóxica de seis compostos com possíveis alvos em S. mutans e C. albicans: terpenóide (tt-farnesol ou Far), flavonoide (mirecetina ou Mir), três hidroxichalconas (2’ hidroxichalconas: AGN e R815; 4’ hidroxichalcona: C135) e um agente modulador da síntese de ácido lipoteicóico (composto 1771). Assim, determinou-se o potencial antimicrobiano (antibacteriano e antifúngico) e antibiofilme (modelos em placas de poliestireno: biofilmes iniciais de 24h e pré-formados de 48h) dos compostos isolados contra os microrganismos isolados. Após, combinou-se os compostos e concentrações promissoras entre si e com e sem flúoreto de sódio (F) para avaliação antibiofilme contra biofilmes mistos (iniciais e pré-formados). Posteriormente, avaliou-se a eficácia da aplicação tópica (5 min) dos compostos promissores contra biofilmes mistos formados em discos de hidroxiapatita com película salivar em 28h (expressão gênica) e 43h [população microbiana, biomassa, proteinas na porção insolúvel, componentes da matriz extracelular (exopolissacarídeos solúveis em água e em álcali, eDNA e proteinas), estrutura 3D e microscopia eletrônica de varredura (MEV) do biofilme]. Ainda, determinou-se o efeito citotóxico dos tratamentos usados para a aplicação tópica sobre monocamanda de queratinócitos orais. Os testes estatísticos consideraram α=0,05. Dentre os agentes avaliados, C135, Far, Mir e 1771 foram promissores para as atividades antimicrobiana e antibiofilme sobre biofilme simples de cada espécie (24 e 48h). Esses compostos combinados com e sem flúor foram eficazes contra as duas espécies microbianas (biofilme misto inicial); entretanto C135+Far+Mir, C135+Far+F e todos compostos combinados foram eficazes contra biofilmes mistos pré-formados. Os biofilmes mistos tratados topicamente com C135+Far+F apresentaram menor expressão gênica para genes de C. albicans associados à síntese (BGL2, FKS1) e remodelagem de -glucanos (XOG1, PHR1, PHR2) (componentes da matriz extracelular), estresse oxidativo (SOD1), efluxo de fármacos (CDR1, ERG11) e maior expressão do gene de S. mutans nox1 (tolerância à estresses oxidativo e ácido); já C135+Far resultou em menor quantidade de exopolissacarídeos insolúveis (quantificação bioquímica), biomassa e proteínas na porção insolúvel dos biofilmes, e redução de expressão de BGL2, ERG11, SOD1 e PHR2. A quantificação dos microrganismos e expopolissacarídeos a partir da microscopia confocal mostrou menor biovolume e porcentagem de cobertura da estrutura 3D para C135+F, C135+Far+F e C135; e nas imagens de MEV, C135+Far e C135+Far+F mostraram C. albicans apenas na forma de levedura. A exposição aos tratamentos por 30 min, mostrou citotoxicidade moderada para C135+F e C135 enquanto todos tratamentos contendo Far e a clorexidina (0,12%) foram altamente citotóxicos. Portanto, as formulações avaliadas afetaram alvos distintos dos biofilmes simples e misto de S. mutans e C. albicans; com efeito mais pronunciado contra o fungo em biofilmes mistos.