Biossensor para identificação da doença de alzheimer - Bovolato, Ana Livia de Carvalho [UNESP] (2021)
A doença de Alzheimer (DA) é a uma doença neurodegenerativa complexa, responsável pela maioria dos casos de comprometimento cognitivo progressivo em pacientes idosos. O processo degenerativo pode iniciar 20 anos antes da manifestação clínica da doença. O diagnóstico precoce e preciso da DA continua laborioso e quase sempre interfaceado com o diagnóstico de exclusão. Neste projeto é proposto o desenvolvimento de um biossensor para a detecção da doença de Alzheimer baseado na detecção de autoanticorpos anti-ATP-sintase subunidade Beta e anti-FRMD8 presentes em amostra periféricas, soro, e em LCR (líquido cefalorraquidiano) de pacientes com a doença de Alzheimer. Para tal foi construído dois sistemas baseados em imunoensaios: 1) imobilizou-se ATP-Sintase subunidade Beta em lâmina de ouro modificadas com 11-MUA e Quitosana e 2) imobilizou-se o peptídeo FRMD8 associado ao lipossomo de DPPG em superfície de ouro modificada com 11-MUA e PEI. Em ambos os casos se quantificou os respectivos anticorpos comerciais diluídos nas proporções não diluído, 0,01mg/mL (puro), 1:10 (0,001mg/mL), 1:100 (0,0001mg/mL), 1:1000 (10ng/mL) e 1:10000 (1ng/mL), com o intuito de gerar uma curva de calibração. Para realizar as medidas foi feita a técnica de SERS (Espectroscopia Raman Aprimorada por Superfície) usando sondas SERS de nanopartículas de ouro modificadas com Anti-IgG porção Fc. Como análise comparativa, ambos os resultados foram comparados com amostras de indivíduos não portadores de DA (como controle Alzheimer, CA) e com anti-HIV p17 como controle experimental (CE). Os sensores foram hábeis de gerar curvas de calibração na qual o biossensor baseado em FRMD8 foi capaz de detectar até 1ng/mL e o biossensor baseado em ATP-Sintase foi capaz de detectar até 10ng/mL. Na validação, apenas o biossensor baseado em ATP Sintase se demostrou eficaz na semi-quatificação e diferenciação entre controles e amostras e através de análise de PCA foi estabelecer e criar um Score SERS e correlacionar com o Score MEEM. Um ponto extremamente importante a se destacar nesse trabalho é que não há biomarcador “perfeito” para a DA devido ao seu múltiplo interfaceamento, sendo, a melhor alternativa, uma análise de múltiplos marcadores.