Gradiente de densidade coloidal equipure™ utilizado pré e pós criopreservação de sêmen equino - Pereira, Raiza Rocha (2023)
O objetivo do trabalho foi verificar a qualidade espermática após utilização de um protocolo modificado de EquiPureTM antes e depois da criopreservação do sêmen equino. Experimento 1, foram utilizadas coletas de 15 garanhões (n=26). Quatro grupos experimentais foram formados: Controle (centrifugação convencional); EG (centrifugação com EquiPureTM antes do congelamento); CT+EG (centrifugação com EquiPureTM após o sêmen ser descongelado); EG+EG (centrifugação com EquiPureTM antes e depois do sêmen ser congelado). No experimento 2 foram realizados testes de fertilidade com os grupos experimentais: controle (centrifugação convencional); EG (centrifugação com EquiPureTM antes do congelamento); CT+EG (centrifugação com EquiPureTM após o sêmen ser descongelado); EG+EG (centrifugação com EquiPureTM antes e depois do sêmen ser congelado) utilizando quatro ciclos de 8 éguas (n=32) e um garanhão considerado “Bad freezing”. As inseminações foram feitas após a ovulação, mediante deposição profunda do sêmen no corno uterino ipsilateral ao lado da ovulação. Para as inseminações oito palhetas foram descongeladas em banho maria a 37°C por 30 segundos com uma concentração de 100 milhões de espermatozoides por palhetas. Os grupos CT e EG tiveram uma dose fixa de 800 milhões de espermatozoides. A dose inseminante dos grupos CT+EG e EG+EG foram dependentes da recuperação espermática pós-centrifugação (v:v) pós descongelamento com EquiPureTM. Os parâmetros espermáticos analisados foram a cinética espermática (motilidade total, progressiva e espermatozoides rápidos) pela análise computadorizada do movimento espermático e estabilidade da membrana plasmática, geração de O2- mitocondrial, potencial mitocondrial e peroxidação lipídica por citometria de fluxo. As análises espermáticas dos grupos Controle e EG foram analisadas imediatamente após descongelação 37ºC por 30 segundos (M0). Os grupos CT+EG e EG+EG foram analisados logo após o procedimento de centrifugação (M0). Todos os grupos foram analisados pós-incubação a 37ºC por 60 minutos (M60). No M0 (P<0,05) o grupo EG+EG aumentou a motilidade total, motilidade progressiva, rápidos, potencial de membrana mitocondrial e estabilidade da membrana plasmática comparada com os outros grupos avaliados; O grupo CT+EG aumentou os parâmetros de rápidos, estabilidade da membrana plasmática, potencial de membrana mitocondrial e diminuiu a produção de ânion superóxido, em relação aos grupos controle e EG. Pós-incubação a 37ºC por 60 minutos(M60) o grupo EG+EG aumentou os parâmetros de motilidade total e motilidade progressiva, rápidos, alto potencial de membrana mitocondrial, e diminui a produção de O 2- comparado com outros grupos. O grupo EG teve diferença do grupo controle na motilidade progressiva e espermatozoides rápidos. O grupo CT+EG diferiu do controle na motilidade total e progressiva, rápidos e peroxidação lipídica. O grupo CT+EG diferiu do EG na motilidade progressiva e espermatozoides rápidos. Controle, EG e CT+EG não diferiram com relação ao alto potencial de membrana mitocondrial e produção de O2- . Os grupos não diferiram na estabilidade da membrana plasmática. As taxas de recuperação dos espermatozoides foram menores nos grupos CT+EG e EG+EG (34,9±2,2; 30,1±1,5, respectivamente). A taxa de fertilidade por ciclo foi maior no grupo EG+EG (62,5%, 5/8) quando comparada aos demais grupos CT, EG, CT+EG (25% 2/8; 25% 2/8; 25% 2/8, respectivamente) os outros grupos testados não tiveram diferença. Concluiu-se, que a utilização de EquiPureTM aumenta a cinética espermática pós-descongelamento do sêmen equino, e que selecionar os espermatozoides antes da criopreservação e pós descongelamento pode aumentar a taxa de prenhez de garanhão considerado “bad freezing”.