Redução do conteúdo lipídico intracitoplasmático de embriões bovinos produzidos in vitro como estratégia para melhorar a crioresistência ao processo de vitrificação - Meneghel, Melissa [UNESP] (2016)
O presente estudo teve como objetivos avaliar os efeitos de estimuladores da lipólise (Forskolin: Forsk) e inibidores da lipogênese (Ácido Linoléico: LA) durante o cultivo in vitro (CIV) sobre o acúmulo de lipídios intracitoplasmáticos e criotolerância do embrião bovino, bem como avaliar o efeito do tratamento dos embriões com Forsk sobre a taxa de concepção após transferência para receptoras. Oócitos (n=1242) foram maturados in vitro (MIV) durante 22h a 38,5°C e 5% de CO2 em ar em meio TCM-199 bicarbonato com 10% SFB e hormônios. Após fecundação, os prováveis zigotos foram cultivados em meio SOF (grupo Controle) suplementado com: 100 μM LA durante todo o período do CIV (grupo LA); ou 5 μM Forsk a partir do dia 6 do CIV (grupo Forsk); ou com associação de LA e Forsk, como acima descrito (grupo LA+Forsk). O CIV foi conduzido a 38,5°C e 5% de CO2 em ar, por 7 dias. O desenvolvimento embrionário foi avaliado no dia 7 do CIV (D7), quando os blastocistos foram corados com Sudan Black B 1% para determinação do conteúdo lipídico intracitoplasmático. Os embriões foram avaliados em microscopia de luz e as imagens obtidas foram analisadas por Q-Capture Pro Image Software. O grupo Controle foi escolhido como calibrador e a média de cada grupo foi dividida pela média do calibrador para calcular a intensidade relativa de pixels, expressa em unidades arbitrárias. Os blastocistos expandidos foram vitrificados (Vitri Ingá®), aquecidos e cultivados por 24h em SOF para determinação das taxas de re-expansão. Os dados foram analisados por ANOVA seguido por teste de Tukey, e as taxas de re-expansão por qui-quadrado (P<0,05). Não foi observada diferença entre os grupos (P>0,05) na taxa de produção de blastocistos entre os grupos (variação entre 47,2±3,9% e 51,6±5,5%). Observou-se diminuição (P<0,05) da quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos nos embriões do grupo Forsk (0,86±0,04) comparado com Controle (0,99±0,02) e LA (1,02±0,02); no entanto, o grupo LA+Forsk (0,95±0,03) não diferiu (P>0,05) dos demais. Não houve diferença (P>0,05) entre os grupos na taxa de re-expansão imediata após o aquecimento (0h: 30,8% a 41,9%). Após cultivo de 24h, a re-expansão foi maior (P<0,05) no grupo Forsk (71,4%) comparado com Controle (46,2%) e LA+Forsk (45,2%); o grupo LA (65,1%) não diferiu dos demais (P>0,05). Baseado nestes resultados, o tratamento com 5 μM Forsk foi escolhido para o desenvolvimento do próximo experimento: oócitos (n=1947) foram aspirados de 22 doadoras Nelore e foram maturados e fecundados in vitro como acima descrito. Os prováveis zigotos foram cultivados de acordo com os tratamentos Controle e Forsk acima descritos e, no D7, foram vitrificados e aquecidos, antes de serem transferidos para receptoras sincronizadas. Os dados da taxa de concepção foram analisados através do modelo linear misto generalizado com medidas repetidas, do pacote Imea4 do software R v3.2.5. A taxa de concepção após transferência dos embriões aquecidos foi semelhante (P>0,05) entre os grupos Controle (25,00±6,53%) e Forsk (30,77±7,39%). De acordo com os resultados obtidos, o tratamento com Forsk foi eficiente para promover a redução da quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos e melhorar a criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro. Apesar disso, não aumentou a taxa de concepção.