Terapia cell free como abordagem terapêutica da Doença do Olho Seco - Carnetta, Carolina Alves [UNESP] (2024)
O meio condicionado (MC) é o secretoma das células-tronco durante o processo de cultura celular, sendo um meio com fatores de crescimento, citocinas e moléculas sinalizadoras livres e vesículas extracelulares, que progressivamente se tornam relevante, tanto para diagnóstico como para terapêutica. Neste campo, identificamos a Doença do Olho Seco (DOS) que impacta profundamente a qualidade de vida das pessoas, cujo tratamento consiste no uso de colírios. O Laboratório de Biologia Celular tem desenvolvido como produto para esses pacientes o autocolírio de soro de sangue, porém existem pacientes com impossibilidade de acesso venoso, ou com sorologias reagentes para doenças infecciosas que são impedidos de utilizar o produto. Também, tendo em vista uma produção sem a necessidade de doador para a produção do tratamento, o projeto teve como objetivo a produção de meios condicionados de células-tronco de diferentes origens, como de cordão umbilical (CTMcup), polpa dentária (CTMPD), tecido adiposo (CTMTA) e límbica (CTL). As células-tronco foram cultivadas em meio DMEM F-12 aditivado e com 10% de soro fetal bovino para caracterização imunofenotípica por citometria de fluxo com marcadores específicos. As células foram cultivadas até atingirem 70% de confluência, momento em que sofreram wash out, uma etapa de lavagem para a retirada do soro fetal bovino (SFB) e receberam o meio DMEM F-12 aditivado xeno free por 48 horas. Após esse período, o secretoma foi coletado, centrifugado e armazenado para posterior uso. Os meios condicionados foram caracterizados utilizando kit Multiplex que permite análise simultânea de vários biomarcadores de citocinas e quimiocinas. Os fatores dosados foram EGF, Eotaxin/ CCL11, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-2, IL-6, IL- 8/ CXCL8, IL9, FGF-2/ FGF-basic, IFNα, VEGF, IFNγ, MCP-1/ CCL2 e TNFα. Após a caracterização, pode-se considerar os resultados dos marcadores IFNY, IL2, IL-8 e VEGF. Enquanto o restante, deverá ser reavaliado, mas acredita-se que o MC tenha potencial para tratamento da DOS pelas células produzirem fatores de crescimento e citocinas que estimulam a regeneração de diferentes tecidos.