Avaliação da atividade leishmanicida de porfirinas associadas à terapia fotodinâmica - Sánchez Uría, Maricely [UNESP] (2022)
As leishmanioses são doenças negligenciadas que afetam milhões de pessoas em todo o mundo. Os fármacos disponíveis para o tratamento apresentam diversos efeitos colaterais e difícil via de administração, o que causa abandono do tratamento pelo paciente e surgimento de cepas resistentes. Nosso grupo de pesquisa atua na etapa pré-clínica de desenvolvimento de fármacos contra as leishmanioses, testando moléculas de origem natural e/ou sintética e investigando seus possíveis mecanismos de ação. Neste trabalho, foi avaliada a atividade leishmanicida (EC50) in vitro de oito porfirinas tetra-catiônicas (4-PtTPyP, 3-PtTPyP, 4-PdTPyP, 3-PdTPyP, 4-TPyP, 3-TPyP, 4-TMePyP, e 3-TMePyP) frente a L. amazonensis através de Terapia Fotodinâmica (TFD). Os compostos foram avaliados quanto à sua foto-citotoxicidade (CC50) em macrófagos murinos e seus Índices de seletividade (IS) foram calculados. As porfirinas 3-PtTPyP (EC50: 8,7 ± 0,4 nM; IS: 213), 3-PdTPyP (EC50: 15 ± 5 nM; IS: 85,2) e 3-TPyP (EC50: 25,5 ± 7,5 nM; IS: 61,9) utilizadas como fotossensibilizadores (FS) através de TFD mostraram-se as mais fototóxicas frente às formas promastigotas do parasita. Já na atividade anti-amastigota (EC50- AMA) foi constatado que em geral os FS: 3-TPyP (47,9 ± 4,4 nM; IS: 32), 3-PdTPyP (38,8 ± 11,5 nM; IS: 32,9) e 3-PtTPyP (27,6 ± 6,7nM; IS:67) são ótimos candidatos para serem futuramente testados in vivo. Devido a interação entre os FS e a luz, foi mensurada a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), encontrando-se que as porfirinas 4-PtTPyP, 3-PtTPyP e 3-PdTPyP induziram os níveis mais altos de EROs no parasita. Adicionalmente, ensaios de co-localização com as porfirinas foram realizados utilizando os marcadores MitoTracker Orange (marcador de mitocôndria) e LysoTracker Green (marcador de lisossomos ou pools acídicos) por microscopia confocal, encontrando-se co-localização das moléculas em ambas as organelas, mitocôndria e pools acídicos. Análises do tipo de morte celular potencialmente induzida pelos FSs foram realizadas através da marcação com brometo de etidio/laranja de acridina (BE/LA). As moléculas 3-PdTPyP, 3-PtTPyP e seus isômeros (4-PdTPyP, 4-PtTPyP) na presença de luz branca após 6 e 24 h de irradiação mostraram-se como os FSs com maior efeito leishmanicida. 3-PdTPyP e 3-PtTPyP induziram a morte do parasita principalmente por necrose (74,2% e 52,2% após 6h, respectivamente; e 79% e 78% após 24h, respectivamente). Enquanto que o isômero 4-PtTPyP induz a morte das promastigotas por like-apoptose (81%) após 6h de irradiação, e após 24 h direccionou os parasitas a morte por necrose (33,6%) e like-apoptose (28,2%), similar ao observado no isômero 4-PdTPyP em ambos os tempos (40% necrose/20%like-apoptose e 54,5%necrose/25,5%like-apoptose, após 6h e 24h de irradiação, respectivamente). Estes dados sugerem que as porfirinas tetra-catiônicas de platina e paládio aqui utilizadas têm um grande potencial para serem utilizadas no tratamento da leishmaniose cutânea por meio de terapia fotodinâmica. Palavras-chave: Leishmanioses, Terapia Fotodinâmica, Leishmania amazonensis, Porfirinas, mitocôndria, lisossomos.