Avaliação de diferentes metodologias para extração de DNA de solo sob cultivo de cana-de-açúcar - Rosa, Márcia Maria [UNESP] (2006)
O solo é um ecossistema caracterizado pela grande complexidade de difícil estudo, devido à sua heterogeneidade, especialmente os microrganismos do solo. Atualmente, ferramentas da biologia molecular têm sido usadas para mostrar o potencial biotecnológico do solo, através dos genes microbianos. A extração direta do DNA é uma etapa importante nesse tipo de estudo, porém, continua sendo um obstáculo para a avaliação da diversidade microbiana do solo. Esses estudos no Brasil apresentam algumas dificuldades, uma vez que a maioria das técnicas foi desenvolvida para solos de clima temperado. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar dez diferentes técnicas para extração direta de DNA de solos em áreas de cultura de cana-de-açúcar sob manejo orgânico e convencional. A eletroforese se apresentou como a técnica mais adequada para se conhecer a eficiência da extração do DNA, através da intensidade e tamanho de suas bandas. A técnica de Selbach (SEL) apresentou melhores resultados, com bandas de DNA mais intensas e sem arraste, indicando a obtenção de uma solução com menores teores de contaminantes. Com a técnica de Direito (DIR) também se verificou bandas de DNA, porém menos fortes e sem arraste. A técnica proposta neste estudo (PRO) resultou em bandas de DNA fortes, porém com arraste, indicando a necessidade de uma etapa para purificação do DNA extraído. Esta mostrou ser a metodologia de mais fácil e rápida execução, sendo que, após processo de purificação a região 16S do DNA ribossomal, utilizando-se primers universais, foi amplificada satisfatoriamente a partir do DNA obtido do solo. Bandas de DNA apresentadas na eletroforese a partir das amostras de solo sob viii manejo orgânico foram mais intensas do que aquelas de manejo convencional. Estes resultados estão relacionados com a maior quantidade de biomassa microbiana presente no solo orgânico... .