Análise Estrutural do Componente Telomerase Transcriptase Reversa de Leihmania major - Viviescas Maldonado, Maria Alejandra [UNESP] (2018)
Os parasitos do gênero Leishmania são protozoários primitivos entre os quais estão os causadores de um espectro de doenças conhecidas como leishmaniose, as quais afetam milhões de pessoas no mundo inteiro, sendo o Brasil um dos países que apresenta maior número de casos por ano. Os tratamentos e vacinas disponíveis para a leishmaniose apresentam problemas como toxicidade, alto custo e baixa eficiência, tornando importante a busca por novos alvos terapêuticos. Dada sua importância para a estabilidade genômica e proliferação celular, os telômeros têm sido considerados como alvos terapêuticos potenciais no tratamento da leishmaniose. Os telômeros são as extremidades físicas dos cromossomos lineares compostos por complexos ribonucleoproteicos que envolvem a interação entre proteínas, DNA e RNA. A maioria dos eucariotos mantêm o tamanho dos telômeros pela ação do complexo telomerase, que é minimamente composto por uma proteína (TERT, Telomerase Reverse Transcriptase) e um RNA longo não codificador (TER, Telomerase RNA). Os dois componentes do complexo telomerase em Leishmania sp. foram identificados, porém não há informação disponível sobre suas estruturas. O objetivo principal deste estudo foi a caracterização estrutural do componente TERT de Leishmania major. Utilizando alinhamentos múltiplos de sequências, foi possível verificar que os quatro domínios estruturais das telomerases canônicas estão presentes no componente TERT em Leishmania sp. Três destes domínios foram estudados independentemente utilizando várias ferramentas de bioinformática. O domínio TEN (Telomerase essential N-terminal) é o mais amino-terminal e é importante na interação com o DNA telomérico e proteínas teloméricas. Em L. major, este domínio mostra uma baixa conservação de estrutura primária quando comparado com outros eucariotos, mas preserva o único motivo estrutural. Este domínio está composto principalmente por elementos desordenados e hélices-α e mostra uma baixa conservação de estrutura primária quando comparado com outros eucariotos, mas preserva seu motivo funcional característico. O domínio TRB (Telomerase RNA Binding) é importante na interação entre o componente TERT e o componente TER. Em L. major, o domínio TRB apresenta uma conservação estrutural parcial, mas possui substituições em resíduos de aminoácidos próprias do gênero Leishmania que poderiam alterar o mecanismo de interação TERT/TER. O domínio RT é o centro catalítico do TERT. Este domínio é altamente conservado em L. major e apresenta conservação de todos os motivos funcionais, assim como do centro catalítico. Para corroborar os resultados in silico com dados experimentais, os três domínios foram individualmente expressos em sistema heterólogo e protocolos de purificação das proteínas recombinantes são apresentados. O objetivo é utilizar estas proteínas em estudos de interação proteínas-ácidos nucleicos e proteína-proteína para verificar o grau de conservação destas interações, uma vez que nesses parasitos o TERT compartilha características estruturais com outros TERT, embora também apresente peculiaridades do gênero. Os resultados gerados neste trabalho podem fornecer conhecimento sobre a evolução da enzima telomerase e indicar se a telomerase de L. major poderá ser considerada um alvo terapêutico parasita-específico.