Expressão de microRNAs em pacientes com diagnóstico histopatológico prévio de Displasia Neuronal Intestinal do Tipo B - Angelini, Marcos Curcio [UNESP] (2018)
Introdução: A Displasia Neuronal Intestinal tipo B (DNI-B) é uma entidade patológica caracterizada por anormalidades nos plexos nervosos submucosos do sistema nervoso entérico, comumente associada à constipação intestinal na infância. Os microRNAs (miRNAs) são pequenos RNAs não-codificantes com um papel importante na regulação da expressão gênica, e têm sido considerados potenciais biomarcadores diagnósticos em diversas doenças. Objetivo: Determinar o perfil de expressão global de miRNAs em amostras de plasma e tecido de biópsia retal de pacientes com DNI-B. Métodos: Cinqüenta pacientes, com idade entre 0 e 15 anos, diagnosticados com DNI-B entre 1998 a 2010, foram incluídos no estudo. Amostras de sangue periférico foram coletadas de todos os 50 pacientes e 10 crianças saudáveis, sem sintomas intestinais (grupo controle). Dos 50 pacientes dos quais o sangue foi coletado, 29 também apresentavam fragmentos embolcados de tecido retal suficiente para extração de RNA. Estes materiais foram processados por microdissecção e agrupados de acordo com as diferentes camadas da parede intestinal. A extração de miRNA foi realizada utilizando o kit miRNeasy Serum / Plasma e o kit de recuperação de todos os Nucleic Acid Isolation para tecidos de biópsia. A análise global da expressão de miRNA foi realizada utilizando a plataforma TaqMan Array Human MicroRNA Card A. Análise de correlação entre a expressão de miRNA em amostras de plasma e biópsia, bem como entre os tecidos derivados das camadas intestinais distintas foi realizada. Resultados: o miRNA let-7a foi superexpresso (~ 7 vezes mais) no plasma de pacientes com DNI-B em comparação com os controles. A análise da expressão do miRNA em amostras de biópsia utilizou a camada mucosa como controle, uma vez que as células ganglionares do plexo nervoso, que estão alteradas em pacientes com DNI-B, não estão localizadas nessa camada. Os miRNAs que apresentaram expressão aumentada (miR-146a, miR-146b) ou diminuída (miR-451, miR-99a, miR-130a, miR-374-5p, miR-100, miR-365, miR-145, miR133b), simultaneamente na submucosa e na associação entre as camadas submucosa e muscular, pode ter atividade relacionada aos neurônios do sistema nervoso entérico. O miR-451 foi o único miRNA significativamente desregulado em tecidos de plasma e nos fragmentos de reto dos pacientes. O miR-451 desempenha um papel regulador nas vias de proliferação celular e apoptose e pode estar ligado à regulação da síntese proteica de GNA11, que por sua vez atua na modulação do sistema transmembrana, incluindo contração muscular intestinal. Conclusão: Nossos resultados demonstram a presença de alterações de miRNA na submucosa e na camada muscular do reto, bem como no plasma de pacientes com DNI-B.