Impacto da associação NPPC/NRG1 e da estimulação sequencial durante a maturação oocitária in vitro (MIV) sobre a progressão meiótica e a produção embrionária - Silva, Nathalia Romeiro [UNESP] (2025)
A maturação in vitro (MIV) de complexos cumulus-oócitos (COCs) é uma técnica essencial na produção de embriões in vitro, embora sua eficácia ainda seja limitada. Este projeto comparou diferentes protocolos de MIV, visando desenvolver uma estratégia mais fisiológica utilizando ampirregulina (AREG), neurorregulina 1 (NRG1) e peptídeo natriurético do tipo C (NPPC) em diferentes momentos da maturação. Os COCs foram aspirados de folículos de ovários bovinos obtidos em abatedouro local e distribuídos nos experimentos. Comparou-se os grupos: FSH: maturação contínua com dosagem convencional de FSH por 22 horas; Sequencial 6h: meio com FSH em dose correspondente à concentração intrafolicular pré-ovulatória, IGF1, estradiol e progesterona por 6 horas, seguido da adição de AREG e NRG1 por mais 16 horas; Sequencial NPPC 6h: idêntico ao Sequencial 6h, exceto pela adição de NPPC nas 6 primeiras horas. Os grupos foram avaliados quanto à progressão meiótica após 8, 10 e 22 horas de maturação. Os mesmos três tratamentos foram prolongados até 24 horas de maturação, e, após esse período, os COCs foram submetidos à fertilização in vitro (FIV) e cultivo in vitro (CIV) para avaliação da formação de blastocistos. Além disso, avaliou-se o impacto de uma maior exposição ao NPPC pela comparação dos grupos: FSH (idêntico ao tratamento FSH, mas por 14 horas); Sequencial NPPC 9h: idêntico ao Sequencial 6h, exceto pela adição de NPPC por 9 horas e Sequencial NPPC 12h: idêntico ao Sequencial 6h, exceto pela adição de NPPC por 12 horas. Os grupos foram avaliados após 11 e 14 horas de MIV. Para analisar a progressão meiótica os oócitos foram desnudos, corados em Hoechst, avaliados em microscópio de epifluorescência e classificados em vesícula germinativa (GV), quebra da vesícula germinativa (GVBD), metáfase I (MI), anáfase-telófase (AnaTel), metáfase II (MII) e degenerado (DEG). Após 8 horas de MIV, os grupos FSH (54.63 ± 6.67%) e Sequencial NPPC 6h (50.92 ± 7.40%) obtiveram taxas de GV semelhantes, enquanto o Sequencial 6h (19.58 ± 5.96%) apresentou uma taxa reduzida em relação aos primeiros. Às 10 horas, a taxa de GVBD + MI foi menor no FSH (59.84 ± 7.40%) e similar entre o Sequencial 6h (92.71 ± 0.52%) e Sequencial NPPC 6h (90.68 ± 3.20%). Não foram observadas diferenças significativas quanto às taxas de expansão dos COCs, clivagem, formação de blastocistos, embriões expandidos e eclodidos e número de células embrionárias totais (p > 0,05). Após 11 horas de MIV, os grupos FSH (12.77 ± 2.8%) e Sequencial NPPC 9h (11.68 ± 4.92%) apresentaram taxas semelhantes de GV, enquanto o Sequencial NPPC 12h (29.18 ± 4.64%) apresentou taxas superiores. Apesar dos protocolos não terem resultado em melhorias significativas na produção embrionária, os dados demonstram que os tratamentos influenciaram a dinâmica meiótica, indicando que sua utilização na modulação da maturação oocitária merece maior investigação como estratégia para a melhoria da eficiência da MIV.