Surto de pitiose equina e padronização de qPCR para rápida detecção de Pythium insidiosum

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2020
Autor(a) principal: Paz, Giselle Souza Da [UNESP]
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Pitiose
Ambiental
Oomicetos
Elicitina
PCR em tempo real
Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/194271
Resumo: A pitiose é uma doença granulomatosa causada pelo oomiceto P. insidiosum, com curso clínico progressivo e frequentemente fatal em humanos e animais. Descrevemos o primeiro surto de pitiose equina envolvendo cinco animais, diagnosticados por cultivo microbiológico e nested-PCR em maio de 2018 em Botucatu e São Manuel-SP, após pastejarem nas margens do rio Tietê. A combinação de técnicas microbiológicas, moleculares e filogenéticas permitiram o isolamento de P. insidiosum de amostras de água do rio e a caraterização filogenética, com a primeira identificação do clado III de P. insidiosum no Brasil. Além disso, realizamos a padronização de qPCR para o diagnóstico de P. insidiosum com alvo molecular o gene ELI025. Para tanto foram utilizadas 23 isolados de P. insidiosum e 10 amostras clínicas (09 de kunkers e 01 de tecido) de animais com pitiose previamente comprovada por cultivo microbiológico ou nested-PCR. O limite de detecção foi de 1pg/μL de DNA, correspondente a 17 cópias do genoma, curvas de dissociação com valor médio de 88,7ºC e coeficiente de linearidade (R²) em 0,994. A sensibilidade, especificidade e acurácia da qPCR foram de 100% em comparação com a nested-PCR, com homologia de 99% dos produtos amplificados para o gene ELI025, específico de P. insidiosum. Concluímos que a descrição do primeiro surto de pitiose equina e a identificação da fonte de infecção podem auxiliar na implantação de medidas preventivas, e a padronização de qPCR com alvo no gene ELI025 auxiliará para o diagnóstico precoce da pitiose, contribuindo substancialmente para a melhora do prognóstico do paciente.
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