Imunolocalização do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-I) e do fator de crescimento epidermal (EGF) em ovários caninos e seus efeitos sobre a maturação in vitro de oócitos: avaliação nuclear - Cardilli, Diogo José [UNESP] (2012)
O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito dos fatores de crescimento IGF-I e EGF sobre a maturação nuclear de oócitos caninos e também imunolocalizar estes fatores em amostras de ovários de cadelas. Foram selecionados 787 complexos cumulus-oocitos (COCs), provenientes de ovários de 34 cadelas, em diferentes fases do ciclo estral, submetidas a ovário-histerectomias eletivas. Os COCs foram dividos em três grupos para diferentes tratamentos, A (TCM 199, n=199), B (TCM 199 + 100ng/mL de EGF, n=208) e C (TCM 199 + 100 ng/mL IGF-1, n=204). Após 96 horas de incubação a 38 °C em atmosfera de 5% de CO2, 50% dos oócitos, desprovidos das células do cumulus, de cada grupo foram corados com Bisbenzimida H33342 (Hoechst) e 50% com 4',6-Diamidino-2-phenylindole (Dapi). A adição de EGF ou de IGF-1 ao meio TCM 199 não foi benéfica à maturação in vitro (MIV) de oócitos de cadelas, e a coloração Hoechst foi mais eficaz para a avaliação dos estágios de maturação nuclear de oócitos de cadelas. Os tratos reprodutivos das 34 cadelas foram coletados, fixados, processados e incluídos em parafina. Os fragmentos de ovários foram cortados, montados em lâmina, desparafinIzados e reidratados. A técnica de Imuno-histoquímica foi realizada utilizando os seguintes anticorpos: Anti-EGF-pc (Ab-3, Calbiochem), Anti- IGF-1-pc (Ab-2, Calbiochem). As amostras foram incubadas overnight. O anticorpo primário foi detectado utilizando IgG secundária biotinilada de cabra anti-coelho ou de coelho anti-cabra, com complexo avidina-biotina-peroxidase. A detecção da reação foi feita com o AEC (Vector). A imuno-histoquímica revelou a presença de EGF e do IGF-1 no ovário da cadela. O EGF foi imunolocalizado no citoplasma das células foliculares (CF) e nos oócitos de folículos secundários e terciários e também na parede vascular, nos cordões...