Identificação e ação de RNAs transportados por exossomos na atrofia de miotubos por TNF-α - Moraes, Leonardo Nazario de [UNESP] (2018)
Os exossomos constituem uma classe de pequenas vesículas extracelulares de aproximadamente 40-150 nm originadas pelo sistema endossomal. Essas vesículas são produzidas constitutivamente por praticamente todos os tipos celulares, e são responsáveis por transportar distintas classes de moléculas, em resposta a diferentes estímulos. O TNF-α é uma citocina pró-inflamatória que em condições tais como AIDS, septicemia, diabetes, insuficiência cardíaca, doença pulmonar obstrutiva crônica, diabetes e câncer, contribui para a atrofia de fibras musculares esqueléticas. Nesse sentido, o objetivo do presente estudo foi caracterizar os RNAs transportados por exossomos de miotubos C2C12 com atrofia induzida por TNF-α e avaliar a ação desses exossomos no fenótipo de mioblastos e miotubos C2C12. Exossomos liberados no meio de cultura de miotubos C2C12 tratados com TNF-α, e de seus respectivos controles, foram isolados por ultracentrifugação e analisados quanto ao seu conteúdo de RNA por RT-qPCR (microRNAs) e sequenciamento de nova geração (RNA total). Além disso, mioblastos e miotubos C2C12 foram tratados com esses mesmos exossomos para analisar a expressão de genes envolvidos com ciclo celular e a capacidade de migração/proliferação (mioblastos), bem como na atrofia celular (miotubos). Nossos resultados demonstraram que exossomos provenientes de miotubos são capazes de alterar os níveis de transcritos de genes envolvidos na proliferação, motilidade e diferenciação de mioblastos em miotubos. Verificamos também que os exossomos provenientes de miotubos tratados com TNFα reduzem a capacidade de migração/proliferação de mioblastos. Além disso, identificamos que o tratamento de miotubos com TNF-α enriquece, nos exossomos, seis miRNAs (mmu-mir-365-3p, -146a-5p, -30b-5p, -34c-3p, -214-3p e -484), e dois RNAs ribossomais mitocondriais (12S e 16S) envolvidos em processos do metabolismo e diferenciação celular. Concluímos que o tratamento de miotubos com TNFα altera RNAs específicos no exossomos, os quais são capazes de alterar a expressão gênica, migração/proliferação e diferenciação de células musculares.