O transcriptoma dos esporozoítos de Cryptosporidium parvum e estágios intracelulares - Matos, Lucas Vinicius Shigaki de [UNESP] (2018)
Os protozoários do gênero Cryptosporidium spp. são parasitos intracelulares obrigatórios, pertencentes ao filo Apicomplexa. Estes parasitos são capazes de se desenvolver nas microvilosidades das células epiteliais do intestino delgado de hospedeiros vertebrados, sendo potencialmente letais em adultos e crianças imunodeficientes. Não existem medicamentos eficazes para controlar essa doença e o desenvolvimento de medicamentos é dificultado pela falta de métodos de cultura eficazes que atuam permitindo detecção completa do ciclo de vida do parasito. Uma lacuna fundamental existe em relação ao entendimento de como os esporozoítos de Cryptosporidium spp. interagem com as células para iniciar a invasão e sua replicação. Assim, foi estudada essa lacuna para explicar a distinção entre aspectos da biologia do Cryptosporidium spp. e a especificidade do hospedeiro. Por meio de um ensaio de imunofluorescência detectou-se separadamente parasitos ligados e que invadiram às células e qual foi sua evolução ao longo de 2, 24 e 48 horas do parasitismo nas células hospedeiras. Com base nos genes mais significativos nas análises LDA (análise linear discriminante) e RDA (análise de redundância) e com maior valor FPKM (fragmentos por quilobase de transcritos por milhão de leituras mapeadas), pode-se perceber uma diferença significativa na expressão gênica desse parasito extracelular e intracelular. Os genes que mais se expressaram em células incubadas por 48 horas após a infecção foram analisados quanto as espécies biológicas de Ontologia de Genes (GO) e estes mostraram significativamente os processos enriquecidos e funções do parasito intracelular. O conhecimento dos genes que são mais expressados pelo Cryptosporidium parvum é muito importante pelo fato de conhecer o comportamento desse parasito nas células, e futuramente impedir sua replicação celular, e desenvolver uma droga eficaz capaz de combater este parasito. Diferenças significativas na expressão gênica foram detectadas, vi tanto em termos de diversidade quanto de perfil transcricional, por meio da análise de RNA-Seq de transcriptoma replicados intracelulares e esporozoítos. Considerando que as funções enriquecidas do transcriptoma intracelular são relacionadas aos ribossomos e síntese proteica, enquanto dos esporozoítos não possui uma assinatura funcional característica. Genes altamente expressos em esporozoítos parecem cumprir funções mais especializadas enquanto nas células infectadas com C. parvum observamos várias funções metabólicas relacionadas a síntese proteica.