Produção, isolamento e caracterização bioquímica de xilanases produzidas pelo fungo termofílico Rasamsonia emersonii por cultivo em estado sólido - Zanoni, Jéssica de Araújo [UNESP] (2017)
O complexo enzimático xilanolítico é responsável por hidrolisar as ligações glicosídicas entre os monômeros constituintes da xilana, sendo esta um polissacarídeo presente na porção hemicelulolítica das paredes celulares vegetais, e suas enzimas se destacam pelas diversas aplicações industriais. O objetivo do projeto foi efetuar a caracterização e isolamento das xilanases produzidas pelo fungo termofílico Rasamsonia emersonii em cultivo em estado sólido. Foram realizados ensaios para avaliar os efeitos do pH, da temperatura, de diversas substâncias químicas, cátions e compostos fenólicos na atividade enzimática. A estimativa da massa molecular foi realizada por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e por cromatografia de filtração em gel em resina Sephadex G-75. Como valor ótimo para o extrato enzimático bruto obteve-se 5,5 e 7,0 para o pH, e 80ºC para a temperatura ótima em incubação de 4 minutos. Em relação à estabilidade do extrato bruto, os maiores valores ocorreram entre as faixas de pH de 4 a 5,5, e 50ºC para temperatura. Todos os reagentes testados apresentaram diminuição da atividade enzimática sobre o extrato bruto, por outro lado, o agente quelante EDTA aumentou 4%. Os cátions testados aumentaram (Na+, K+, Cd2+, Sr2+, Ca2+) ou diminuíram (Zn2+, Al3+, Fe3+, Mn2+, Mg2+, Ni2+, Ba2+, Li+, Co2+, Cr3+ e Cu2+) a atividade. Em relação aos compostos fenólicos, somente o ácido tânico induziu decréscimo da atividade xilanolítica do extrato bruto. O pI foi estimado em 6,5 por focalização isoelétrica em gel de agarose. A massa molecular das isoformas por filtração em gel não pôde ser estimada devido a uma interação inespecífica da xilanase de maior massa molecular com a resina Sephadex. Pela análise de SDS-PAGE é possível observar que todas as isoformas se encontram abaixo de 45 kDa. Na análise por zimografia observou-se a presença de quatro xilanases, que foram isoladas pela extração do gel de poliacrilamida. Todas se mostraram mais ativas em pH 5,5 quando comparadas em pH 7,0. Avaliaram-se os parâmetros termodinâmicos da xilanase isolada C, que demonstrou mais de 6 horas à 80ºC como tempo de meia vida, e elevada resistência estrutural à desnaturação térmica quando avaliados os resultados de entropia, energia de ativação e entalpia.