Investigação teórica e experimental dos sítios de interação entre a Albumina do Soro Humano (HSA) e o aminoácido Dansilglicina - Boza, Izabelle Amorim Ferreira [UNESP] (2018)
A Albumina do Soro Humano (HSA) desempenha um papel importante no transporte de substâncias com propriedades farmacológicas devido a sua alta concentração e especificidade plasmática, colocando-a como uma das proteínas fundamentais responsáveis pela implicação farmacocinética dos fármacos. O derivado de aminoácido dansilglicina (DanGly) é um marcador fluorescente específico para o sítio II na HSA. Além disso, ao se ligar à proteína, a DanGly adquire quiralidade, uma característica que também pode ser usada para caracterizar o sítio de ligação de novos compostos na HSA. Este trabalho teve como objetivo elucidar a indução de quiralidade na DanGly por sua ligação com a HSA. Os espectros de Dicroísmo Circular Eletrônico (ECD) da DanGly (100 μM) na ausência ou presença de HSA (30 μM) em solução fosfato de sódio 50 mM em pH 7,0 foram obtidos num espectropolarímetro Jasco J-815 a 25o C com uma resolução de 1 nm numa velocidade de 50 nm/min. Os ECDs teóricos foram simulados usando a abordagem da Teoria do Funcional da Densidade (DFT) com os funcionais híbridos B3LYP e CAM-B3LYP no conjunto de bases 6-311 ++ G (2d, p) e o Modelo de Solvação baseado em Densidade (SMD) para os solventes etanol, metanol, acetonitrilo, água e tetra-hidrofurano; os cálculos foram realizados com o programa Gaussian09. A formação do complexo DanGly-HSA em tampão resultou no aparecimento de um espectro positivo de ECD centrado em 346 nm. Considerando que o sinal do ICD deve surgir a partir de uma conformação quiral da DanGly adquirida por ligação na proteína, os cálculos foram inicialmente realizados para obter asconformações estáveis com foco na inversão da configuração centrada no átomo de nitrogênio: grupo alfa-amino. No entanto, ambas as configurações: R e S mostraram sinais de ECD semelhantes, positivos para configuração R e negativo para configuração S. Cálculos da superfície de energia potencial (PES) da DanGly foram realizados, enfocando os ângulos diédricos formados pela ligação do grupo -N (CH3)2 do anel naftalenico. A análise das várias conformações obtidas e seus respectivos ECDs teóricos revelaram que o diedro de 150° (ECD positivo centrado em 320 nm) apresentou excelente similaridade com o espectro experimental. Por outro lado, o diedro de 80° apresentou um sinal do espectro de ECD oposto ao observado experimentalmente. Além disso, observamos que o átomo de nitrogênio do grupo -N (CH3)2 apresentou a maior contribuição para a transição HOMO-LUMO que dá origem à transição eletrônica n-pi* envolvida na geração do sinal de ECD. A análise de docking molecular, usando o programa GOLD 5.5, da complexação entre DanGly e HSA revelou uma conformação com um diedro similar (150°) àquele obtido teoricamente (DFT) e cujo ECD está em acordo com o resultado experimental. Em conclusão, através do estudo das possíveis conformações para a dansilglicina e o cálculo do seu ECD teórico, foi possível identificar a origem do sinal de ECD obtido pela complexação entre DanGly e HSA.